瘿蚊科3种昆虫核糖体DNA的克隆及序列分析段云郭培巩中军摘要瘿蚊科是双翅目昆虫中的重要类群。本研究对瘿蚊科3种昆虫—麦红吸浆虫、菊花瘿蚊和食蚜瘿蚊的核糖体DNA进行PCR扩增、克隆、测序及序列分析，并对ITS-1在麦红吸浆虫4个地理种群中的遗传变异情况进行分析。结果表明，从3种昆虫中获得的核糖体DNA序列包括：部分的18SrDNA（44bp）、28SrDNA（37bp），全部的ITS-1（487～535bp），5.8SrDNA（121bp）及ITS-2（336～352bp）序列。3种昆虫ITS序列的碱基差异百分比在17.21%～29.59%之间，共含有206个变异位点。ITS-1序列在麦红吸浆虫4个地理种群中比较保守，只有4个变异位点，单倍型多样性为0.3117～0.7965，核苷酸多样性为0.0006～0.0022。本研究为今后瘿蚊科昆虫的分类鉴定、系统发育和遗传进化等相关研究提供了基础。关键词瘿蚊科;核糖体DNA;序列分析;分子鉴定：Q963：ADOI：10.16688/j.zwbh.2019400AbstractCecidomyiidaeisanimportantinsectgroupintheorderDiptera.TheribosomalDNAsfromthreegallmidges，Sitodiplosismosellana，RhopalomyialongicaudaandAphidoletesaphidimyza，werestudiedbyPCRamplification，cloning，sequencingandsequenceanalysis.ThegeneticvariationofITS-1infourgeographicalpopulationsofS.mosellanawasanalyzed.TheresultsshowedthattherDNAsequencesofthreeinsectsincludedpartialsequencesof18SrDNA（44bp）and28SrDNA（37bp），completesequencesofITS-1（487-535bp），5.8SrDNA（121bp）andITS-2（336-352bp）sequences.ThedifferenceamongITSsequenceswasbetween17.21%and2959%，includingatotalof206variantsites.TherewaslittledifferenceintheITS-1sequenceamongthefourgeographicalpopulationsofS.mosellana，withonly4variantsites，ahaplotypediversityof0.3117-0.7965，andanucleotidediversityof0.0006-0.0022.Thisstudyprovidesabasisforthestudyofidentification，phylogenyandgeneticevolutionofgallmidgesoftheCecidomyiidaefamily.KeywordsCecidomyiidae;ribosomalDNA;sequenceanalysis;molecularidentification瘿蚊科Cecidomyiidae隶属于双翅目Diptera，是一类雄虫触角具环毛，翅上显著纵脉不超过5条的蚊类昆虫。由于该科许多种类昆虫的幼虫在植物上形成虫瘿，故通称为瘿蚊[1]。瘿蚊科是具有重要经济意义的一个大科，在世界范围内广泛分布[2]。目前，全球已知的瘿蚊科昆虫有6590多种，其中包括多种为害农作物、蔬菜、花卉、树木和果树的重要害虫[3]，如麦红吸浆虫Sitodiplosismosellana、黑森瘿蚊Mayetioladestructor、菊花瘿蚊Rhopalomyialongicauda、刺槐叶瘿蚊Oblodiplosisrobiniae和高粱瘿蚊Contariniasorghicola等，也包括若干捕食蚜蟲、螨类和介壳虫等的天敌昆虫，如食蚜瘿蚊Aphidoletesaphidimyza和Feltiellaacarisuga等[4-7]。目前，瘿蚊科昆虫已成为研究昆虫-寄主之间协同进化的重要材料。传统的瘿蚊科昆虫种类鉴定主要以形态学特征为依据，对于相近种，特别是对于幼虫和卵，利用形态学特征鉴定存在很大的局限性，而以DNA序列为基础的分子鉴定，结果更加准确可靠。目前已开发的瘿蚊科昆虫DNA分子标记还相对较少，且主要集中在线粒体基因的应用上[5，8-10]，而关于核基因序列的相关研究却很少[11]。内转录间隔区（internaltranscribedspacer，ITS）是高度重复的核糖体DNA（rDNA）中介于18SrDNA和28SrDNA之间的内转录间隔区，包括存在于18SrDNA和5.8SrDNA之间的内转录间隔区1（ITS-1）和存在于5.8SrDNA和28SrDNA的内转录间隔区2（ITS-2）两个序列[12-13]。ITS受外界环境因素的影响较小，与编码区域相比具有进化速度慢的特点，在种内具有高度的保守性，在不同种间及亚种间又表现出极大差异[14]。同时，ITS具有大量的拷贝，很容易进行PCR扩增[15]。因此，ITS作为一种重要的分子标记和线粒体DNA信息的补充，在昆虫学的研究中越来越受到重视，并且已被广泛用于昆虫分类学、昆虫分子系统学研究中，在物种鉴定、（种内和近缘种的）亲缘关系和系统发育分析、遗传进化、扩散/传播及昆虫与环境的关系等方面的研究中起着重要的...