园艺学报，（）：–2014411224742480http://www.ahs.ac.cnActaHorticulturaeSinicaE-mail:yuanyixuebao@126.com收稿日期：2014–07–24；修回日期：2014–10–31基金项目：国家‘十二五’农村领域科技计划课题（2013BAD14D0502）基于叶绿体DNAPCR-RFLP分析柿及其近缘种亲缘关系梁晋军，梁玉琴，傅建敏*（国家林业局泡桐研究开发中心，中国林业科学研究院经济林研究开发中心，郑州450003）摘要：应用5对叶绿体DNA（cpDNA）特异引物对柿及其近缘的8个种共32个基因型的cpDNA进行PCR扩增。采用7种限制性内切酶对其扩增产物酶切位点变异分析表明，在供试柿属植物中存在丰富的种间多态性，但供试22个柿种内基因型未检测到变异位点。应用NTSYS中UPGMA法聚类和主坐标分析表明：柿与金枣柿最近缘，其次分别是油柿、云南野毛柿、浙江柿和君迁子，而与美洲柿和乌柿相距较远。野柿（浙江）为柿的变种，聚类结果也表明野柿（浙江）与柿有一定差异。关键词：柿；cpDNA；PCR-RFLP；遗传多样性；亲缘关系中图分类号：S665.2文献标志码：A文章编号：0513-353X（2014）12-2474-07GeneticRelationshipsofDiospyroskakiandRelatedDiospyrosSpeciesUsingChloroplastDNAPCR-RFLPMarkersLIANGJin-jun，LIANGYu-qin，andFUJian-min*（ChinaPaulowniaResearchCenter，Non-timberForestResearchandDevelopmentCenter，ChineseAcademyofForestry，Zhengzhou450003，China）Abstract：FivespecialprimerpairsofchloroplastgenomewereusedtoamplifiedchloroplastDNA（cpDNA）regionsin8Diospyrosspeciesincluding32genotypes.Theproductsweredigestedbysevenrestrictionenzymes.TheresultsshowedhighinterspecificcpDNAvariationswithinthegenusDiospyros.Twenty-twoD.kakigenotypesweredetectednovisuallyvariationinthisstudy.D.kakihadcloselyrelationshipwith‘Jinzaoshi’，followedbyD.oleifera，D.artrotricha，D.lotusandD.glaucifolia，butdistantfromD.virginianaandD.cathayensisindiagrambasedontheUPGMAclusteranalysisbyNTSYSpc2.10eprogram.Wildpersimmon（Zhejiang）isavarietyvarietasofpersimmon.Theresultshowedthatwildpersimmon（Zhejiang）isnotcloselysimilartoD.kaki.Keywords：Diospyroskaki；cpDNA；PCR-RFLP；geneticdiversity；geneticrelationship柿（DiospyroskakiThunb.）品种多数为六倍体，2n=6x=90，但也有少量九倍体，2n=9x=135（Zhuangetal.，1990）。前人已经通过各种分子标记对柿及其近缘种亲缘关系进行研究，但结果差异较大。Yuri和Shozo（1994）通过对柿及其近缘种叶绿体DNA（cpDNA）和线粒体DNA（mtDNA）*通信作者Authorforcorrespondence（E-mail：fjm371@163.com）12期梁晋军等：基于叶绿体DNAPCR-RFLP分析柿及其近缘种亲缘关系2475的RFLP分析，发现老鸦柿与柿最近缘；Keizo等（1998）对柿属植物cpDNAPCR-RFLP分析的结果表明柿与美洲柿最近缘；Hu等（2008）、Guo和Luo（2011）分别用cpDNAPCR-RFLP和SSR分析表明柿与君迁子最近缘；Keizo等（2008）用nrDNA的ITS区和cpDNAmatK序列分析的结果表明柿与油柿最近缘。此外，Hu等（2008）和Tang等（2014）分别用cpDNAPCR-RFLP和ITS，matK序列变异分析证明金枣柿为一个新种。由于柿倍性复杂，其核基因组结构和序列也是复杂多变，从核基因组开发分子标记有一定难度，相较于核基因，叶绿体基因组结构和序列非常保守，所以叶绿体基因组能很好地用于种间甚至种内系统进化和亲缘关系的研究（Randalletal.，1998）。目前，基于cpDNA的PCR-RFLP的分子标记已广泛用于遗传多样性、系统进化和植物种类鉴定等研究（Claudiaetal.，2004；Pharmawatietal.，2004；Baoetal.，2005）。本研究中通过对4个柿近缘种（君迁子、浙江柿、金枣柿和油柿）cpDNA全基因组测序结果对比分析，找出变异较大的4个区段（trnH-matK、rpoB-petN、trnS-trnfM和ndhA）和1个功能基因（rbcL）片段，并设计特异引物对32份柿属植物的5个cpDNA区域进行PCR-RFLP分析，以期为柿及其近缘种亲缘关系提供有效证据。1材料与方法1.1材料试材为柿及其近缘种共8种，1个变种32个基...