高效液相色谱法测定止泻灵颗粒中橙皮昔含量【摘要】目的：建立止泻灵颗粒中橙皮昔含量的HPLC测定法。方法：采用十八烷基硅烷键合硅胶柱，流动相：乙睛-0.2%磷酸溶液(21：79),流速：1.0ml-min-1,检测波长：284nmo结果：线性范围：0.2ug〜1.0ug/mL(r=0.9997)。精密度：0.31%(n=5)平均回收率为97.3%o结论：试验表明，该方法简便，快速，结果准确，重现性好。【关键词】止泻灵颗粒；橙皮昔；HPLC【中图分类号】R286【文献标识码】A【文章编号】1004-7484(2012)12-0036-02止泻灵颗粒是《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第十七册收载的品种。是由党参、白术、陈皮、白扁豆、甘草、慧该仁、山药、莲子、泽泻、茯苓等十味中药制成的颗粒剂，具有补脾益气、渗湿止泻之功效，用于脾虚弱所致的大便澹泄，饮食减少，食后腹胀，倦怠懒言，以及慢性肠炎见上述证候者。本实验对组方中主药之一陈皮中的主要疗效成分橙皮昔的含量采用HPLC法进行测定研究，该方法操作简便、准确、重现性好1仪器与试药1.1仪器日本岛津LC-10ATvp髙效液相色谱仪，SPD-lOAvp检测器；浙江大学N2000色谱工作站；Kromasil十八烷基硅烷键合硅胶柱（4.6mmX250mm,5um）,赛多利斯BS210S型电子天平。1.2试药橙皮昔对照品（中国药品生物制品检定所110721-200712）；乙膳为色谱纯；其他试剂均为分析纯。止泻灵颗粒购于本市医药公司，共3批，批号：20080302,20080804,20080915c2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：Kromas订十八烷基硅烷键合硅胶柱（250mmX4.6mm,5um）流动相：乙睛-0.2%磷酸溶液（21：79）,流速1.Oml/min,检测波长：284nm,进样量：20ul,理论板数以橙皮昔峰计不低于3000o2.2检测波长与流动相的选择以岛津UV-2550紫外分光光度计扫描了橙皮昔对照品、止泻灵颗粒样品所含橙皮昔的光谱吸收曲线，两图谱完全一致，均在283〜284nm有最大吸收，且空白无干扰，选择284nm为检测波长。（见图2）。曾以乙睛-水（20：80）、乙M-0.2%磷酸溶液（21：79）、甲醇-醋酸-水（35：4：61）分别作流动相，以乙睛一0.2%磷酸溶液（21：79）作流动相供试品色谱分离效果最好，保留时间较适宜。A.橙皮昔对照品B.止泻灵颗粒供试品C.陈皮阴性对昭八\、2.3对照品溶液的制备精密称取橙皮昔对照品适量，加甲醇溶解并稀释橙皮昔的浓度为50ug-ml-1的溶液，作为对照品溶液。2.4供试品溶液的制备取装量项下的供试品研细，精密称取1.5g置具塞的锥形瓶中，精密加甲醇50ml,密塞，称定重量，冷浸2小时，超声处理（功率300W,频率50khz）1小时，放冷，并称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。2.5阴性对照试验按照本品的处方、制法制备缺少陈皮的模拟样品，按供试品溶液制备方法制成陈皮阴性对照溶液，将橙皮昔对照品溶液、供试品溶液和陈皮阴性对照溶液，分别注入高效液相色谱仪进行测定，见图3o结果表明处方中其它成分不干扰橙皮昔的测定。A.样品B.对照品C.空白2.6线性关系考察精密量取2.3项下的对照品溶液2ml,4ml,5ml,6ml,8ml,10ml至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密量取20ul,注入高效液相色谱仪中，记录色谱图，以对照品溶液进样量（ug）为横坐标、峰面积积分值为纵坐标，计算回归方程：Y=110668X-7086.5,—0.9997。表明橙皮昔在0.2ug〜1.0ug范围内与呈峰面积呈良好的线性关系。2.7稳定性试验取同一对照品溶液和供试品溶液，分别在0,2,4,8,12,16,24h进样测定。对照品峰面积的RSD为0.92%,供试品的橙皮昔峰面积的RSD为1.06%,说明橙皮昔至少在24h内稳定。2.8精密度试验精密吸取3.3项下的对照品溶液，分别量取20ul重复进样5次，测得峰面积平均值为1197561.7,RSD为0.31%。2.9重复性试验取同一批号的样品（20080601）,按3.3项下的方法平行制备5份供试品溶液并测定，计算含量，结果为9.64,9.65,9.58,9.61,9.54mg/袋，平均含量为9.60mg/袋，RSD为0.47%。2.10回收率试验精密称取的供试品1.4988g,置锥形瓶中，精密加入甲醇50ml,,密塞，称定重量，超声处理（功率300W,频率50Khz）1小时，放冷，在称定重量，用甲醇补足减失的重量,摇匀，过滤，测定含量。分别精密量取3份续滤液各5ml,分别精密加入已知浓度的对照品溶液（0.1556...