肋骨骨髓CK19mRNA基因表达在食管癌微转移中的意义卓毅苏祖栋(通讯作者)王于(福建医科大学附属第一医院胸外科福建福州350005)【摘要】目的利用巢式RT—PCR法对食管癌患者的肿瘤组织及肋骨骨髓中的CK19mRNA进行检测，探讨两者之间的相关性，结合相应的临床资料，从而对食管癌早期远处微转移做出诊断。方法采用巢式RT—PCR法检测食管癌患者(无远处转移35例，有远处转移8例)及食管良性病变患者的肋骨骨髓中CK19mRNA基因的表达(共12例)。结果食管良性病变患者的肋骨骨髓中均未检测出CK19mRNA基因表达，无远处转移食管癌患者肋骨骨髓中CK19mRNA表达阳性率为54.3%(19/35),有远处转移的食管癌肋骨骨髓中CK19mRNA表达阳性率为100%(8/8),对无远处转移的患者随访24个月，CK19mRNA表达阳性的患者出现远处转移率为68.4%(13/19)，CK19mRNA表达阴性的患者出现远处转移率为12.5%(2/16)。结论食管癌在早期阶段，如果在骨髓中检测到CK19mRNA表达，提示己有食管癌远处微转移，因此早期发现食管癌微转移对判断预后及制定相应的治疗方案有重要的临床意义。【关键词】食管癌巢式逆转录聚合酶链反应角蛋白微转移【】R73-37【文献标识码】A【】1672-5085(2014)15-0112-02食管癌是最常见的恶性肿瘤之一，全世界每年新发病例数超过30万，我国食管癌发病率居世界之首，近年来食管癌的诊疗技术不断提高，但远期生存率却无明显提高[1],理论上食管癌患者经过根治性治疗和综合治疗后5年生存率应达到70%，但临床上部分患者仍发生肿瘤早期转移和复发，特别是PN0期食管癌患者根治性切除手术后，肿瘤的转移、复发率可高达30%〜50%[2]。从而提示nia期食管癌患者术后早期转移和复发可能与微转移灶有关。因此早期发现食管癌微转移对判断预后及制定相应的治疗方案有重要的临床意义。细胞角蛋白是主要表达于上皮细胞的一组蛋白，其中CK19是具奋严格的上皮特异性的癌细胞标志物，在正常骨髓、淋巴结和血液中无表达。本研宄初步探讨了CK19作为食管癌微转移标志物的可行性。1资料与方法1.1一般资料（1）研究组：选择2010年9月至2011年3月确诊为食管癌而未发现远处转移II术后病理分期均为II期的患者35例，其中男性26例（平均年龄57.9岁），女性9例（平均年龄56.6岁），术前检查均未发现远处转移。（2）对照组：阳性对照组：明确发现远处转移的患者8例（平均年龄59.4岁），主要为单个锁骨上淋巴结转移，可以行同期手术的患者；食管良性病变对照组12例（平均年龄42.3岁）：食管平滑肌瘤7例，贲门失弛症5例。1.2标本的采集及处理所奋肿瘤患者手术前均未做过肿瘤针对性治疗，取肿瘤及切除肋骨中的骨髓组织液氮保存，然后转入-80°C冰箱保存。良性病变患者切除部分肋骨取骨髓组织同法保存。1.3实验方法参照Kruger等设计的CK19特异性引物序列，CK19外引物的上下引物分别为：51—TTTGAGACGGAACAGGCTCT—3\51—AGCTCAATCTCAAGACCCTG—3*，扩增片段长度为426bp。CK19内引物的上下引物分别为：5*—GCAGATCGAAGGCCTGAA—3*，5'—TGAACCAGGCTTCAGCATC—31,扩增片段长度为209bp。另设计beta;-actin作为内参照，以检验各标本RNA的存在和完整性；提取骨髓单核细胞总RNA并进行逆转录，得到cDNA第一链；在外引物反应体系及反应条件，取逆转录得到的cDNA进行扩增，反应条件为：94°C5分钟，94°C60秒，55°C60秒，72°C600秒，30次循环扩增，72°C终止延伸7分钟；取第一轮PCR产物进行扩增，反应条件同上。实验用B-actin作为参照,PCR产物进行1%琼脂糖凝胶电泳观测得到结果。1.4术后患者的随访对行食管癌根治术的患者通过电话、门诊及入院复查等方式的随访，每三个月进行颅脑、胸部、腹部CT;上消化道造影；腹部B超等检查，对比CK19mRNA表达阳性和阴性的患者术后24个月内复发转移情况，记录整理各项数据1.5统计学分析将所得出的数据进行X2检验，并运用SPSS软件建立Logistical回归模型，显著性水准a定为0.05。2结果2.1P《0.053讨论当前恶性肿瘤的骨髓微转移的研究是个热点问题。近年来国外对消化道肿瘤、呼吸道肿瘤骨髓微转移的研究报道较多；而国内的研究人部分仅限于肺癌、胃癌、结肠癌及乳腺癌且检测标本大多数为淋巴结，少数为外周血。国内外对食管...