七年制学生机能实验设计项目申请书项目名称：维生素D对2型糖尿病的影响指导教师：年级、班级：学生姓名：联系电话：基础医学院机能学实验室2010年11月一、立题依据及意义（国内外研究现状、水平和发展趋势；创新之处和主攻关键）糖尿病（diabetesmellitus）是一种在遗传和环境因素长期共同作用下，由于胰岛素分泌绝对或者相对不足所导致的渐进性蛋白质、脂肪、水和电介质代谢发生紊乱的一系列综合征，其中以高血糖为主要标志。随着人们的生活水平的提高、生活方式和饮食结构的变化以及人口老龄化，糖尿病的发病率呈逐年上升趋势，目前已成为最常见的慢性病之一。而非胰岛素依赖性糖尿病的患者约占总数的90%，多发生于四十岁以上的人群和老年人，近年其发病年龄有下降趋势。如果能够通过一些方法来降低NIDDM的发病率，那对人们的健康无疑是一大好处。近年来一些调查和研究发现维生素D与糖尿病的发生存在一些关系。国际内科学杂志一篇名为ClinicalprogressinstudiesonvitaminDandtype2diabetes的文章指出：研究发现维生素D与2型糖尿病的发生关系密切.低维生素D血症的人群中2型糖尿病的发病率明显增高。芬兰赫尔辛基国家公共卫生研究所的保罗·克内克特博士说：人们一直认为，维生素Ｄ含量高可能会增加人们患ＩＩ型糖尿病的风险，但我们的研究并没有发现这方面的证据。克内克特博士所进行的追踪研究中，共有１８７人患上ＩＩ型糖尿病。统计数据显示，当获取的血液样本排除了年龄、性别和季节因素后，血液中维生素Ｄ含量和罹患ＩＩ型糖尿病的关系与之前的看法截然相反。PubMed中一篇名为ThepotentialtoimprovediabetescontrolwithvitaminDreplacementinAfricanAmericanpatients:casereportandliteraturereview.文章提到非籍美国黑人患NIDDM的比例较高，同时他们的维生素D缺乏率也很高，而补充维生素D对他们的NIDDM也存在一定的治疗作用。但是，以上这些说法是否是放之四海皆准的呢?所以，针对这一问题，我们小组设计了这项实验，来探索维生素D对NIDDM的发生究竟有什么作用。我们主要研究维生素D对NIDDM的预防效果，所以实验分为三组，对照组，糖尿病组，预防组。二、技术路线（动物、药品、仪器设备、实验方法）动物：120只健康雄性大鼠药品：STZ、1,25-(OH)2D3、柠檬酸盐缓冲液、花生油、肝素、仪器设备：哺乳动物手术器械一套、注射器、试管、便携式血糖仪、流式细胞仪、胰岛素ELISA检测试剂盒实验步骤：1、模型的建立：随机选取40只体重在20～25g的健康雄性大鼠，连续5d腹腔注射STZ（40mg·kg-1），分别于注射STZ的第1、2、3、4、6周末各测一次血糖，，以血糖水平持续高于11.1mmol/L为判断成模的标准。造模期间死亡动物不计入统计范围。2、动物分组：正常对照组，连续5d腹腔注射与糖尿病组等容量柠檬酸盐缓冲液；糖尿病组，成模大鼠隔日腹腔注射与1,25-(OH)2D3组等容量花生油，共15次；预防组，先隔日腹腔注射1,25-(OH)2D3（5μg·kg-1），共15次，然后再连续5d腹腔注射STZ（40mg·kg-1）。3、样本采集与处理：各组大鼠断尾取血便携式血糖仪检测血糖水平；实验结束后采集血清放射免疫法检测血清胰岛素水平，采集胰腺标本免疫组化法观察胰岛细胞Bax和Bcl-xL蛋白表达水平。4、统计学分析：SPSS10.0软件处理。结果以±s表示。同组内处理前后比较用配对t检验。组间比较用完全随机设计的方差分析，若结果有意义再进行多个样本均数间比较的SNK-q检验（Bax、Bcl-xL阳性率经平方根转化后再进行统计分析）。糖尿病发病率用fisher确切概率法。P＜0.05表示差异有显著性，P＜0.01表示差异有极显著性。三、预期结果（研究的总体安排和进度；预期研究成果）记录实验结果，观察动物血糖，血清胰岛素水平和胰岛细胞Bax和Bcl-xL蛋白表达水平，并作统计学分析。其中血糖浓度是反映预防效果的最重要因素，为主要的观察项目。而胰岛细胞Bax和Bcl-xL蛋白表达水平则可以一定程度上表现出维生素D对胰岛B细胞的保护和促进损伤的β细胞修复再生的作用。各个指标要综合来看才能最后下结论。理想的实验结果预计：若预防组的血糖浓度较糖尿病组低，血清胰岛素水平和胰岛细胞Bax和Bcl-xL蛋白表达水平较糖尿病组高,...