PTEN基因及其相关因子HIF-1在急性髓性白血病骨髓基质细胞中的表达及意义

PTEN基因及其相关因子HIF-la在急性髓性白血病骨髓基质细胞中的表达及意义武寿荣(江苏省滨海县人民医院江苏滨海224500)【屮图分类号】R733.3【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2012)16-0010-02【摘要】A的探讨PTEN棊因及其相关因子HIF-l&alpha;在急性髓性白血病(AML)骨髓基质细胞屮的表达及意义。方法取30例急性髓性白血病患者(AML组)和30例非AML患者(对照组)骨髓基质细胞分离纯化后培养,以RT-PCR检测其屮PTENmRNA的表达,并通过凝胶图像分析系统分析其相对含量。同时以Western免疫印迹技术检测骨髓基质细胞屮PTEN和HIF-l&alpha;蛋白表达。结果急性髓性白血病患者骨髓基质细胞屮PTEN基因和蛋白的表达率及相对含量均显著低于对照组(P<0.01,P<0.05),HIF-l&alpha;蛋0表达率及表达水平显著高于对照组(P<0.01,P<0.05)。HIF-l&alpha;在骨髓基质细胞中的表达上调与PTEN的低表达相关联(P<0.05)。结论PTEN基因可能是抑制白血病异常骨髓造血形成的重要因子,而PTEN表达缺失或下调可能诱导其下游因子HIF-l&alpha;的高表达。【关键词】急性髓性白血病PTEN缺氧诱导因子-l&alpha;骨髓基质细胞【Abstract】ObjectiveToinvestigatetherelationshipamongexpressionofPTENgeneandHIF-l&alpha;inpatientswithacutemyeloidleukemia(AML).MethodsBonemarrowstromalcells(BMSCs)from30AMLpatientsand30non-AMLcontrolswerecultivated.TheexpressionofPTENmRNAweredetectedbyRT-PCRandtherelativeamountswereanalyzedwithgelscansystem.Simultaneously,theexpressionofPTENandHIF-l&alpha;proteinsinBMSCsweremeasuredbyWesternblotting.ResultsTheexpressionrateandlevelsofPTENmRNAandproteininAMLgroupwerealllowerthanthatincontrolgroup(P<0.01,P<0.05).Bycontraries,thepositiveexpressionrateofHIF-l&alpha;proteininAMLgroupwashigherthanthatincontrolsobviously(P<0.01,P<0.05)an---本文来源于网络,仅供参考,勿照抄,如有侵权请联系删除---dtheexpressionlevelsweresignificantstronger(P<0.05).TherewerecertainnegativecorrelationbetweenPTENandHIF-l&alpha;inallBMSCs.ConclusionsPTENgenewouldinhibitedtheformationoftheabnormalhematopoieticmicroenviroment.Thelossordown-regulationofPTENgenewouldleadtheover-expressionofHIF-l&alpha;inAML.【Keywords】AMLPTENHIF-l&alpha;BonemarrowstromalcellPTEN基因又名MMAC1或TEP1基因,是一种0前公认的肿瘤抑制基因,与恶性肿瘤的生长、细胞分化、增殖、凋亡等许多病理过程密切相关[1】。研究表明,PTEN基因对造血干细胞的活化和分化起重要的调控作用,对白血病的发生有重要的抑制作用[2]。而PTEN基因的缺失或突变可以影响下游诸多肿瘤相关因子的表达,其中包括缺氧诱导因子-l&alpha;(HIF-l&alpha;)。HIF-l&alpha;是广泛存在于人体内的一种转录因子,苏在肿瘤基质和肿瘤缺氧微环境的形成中发挥重要的作用,对恶性肿瘤的生长、转移等皆奋影响[3]。B前已知HIF-l&alpha;在肿瘤中的表达可能与PTEN基因冇关,但其确切机制尚未阐明。本研究采用RT-PCR技术检测了急性髓性白血病患者骨髓基质细胞中的PTEN基因,并用Western免疫印迹技术分析了PTEN及HIF-l&alpha;蛋白的表达情况,以分析两者在白血病异常骨髓基质细胞形成中的作用和相互关系。1材料与方法1.1标本来源收集附院2008-2010年初治成人急性髓性白血病患者骨髓30例,另收集同期非血液系统恶性疾病患者或査体患者骨髓30例设为对照组,经均衡性检验,两组年龄、性别差异无统计学意义(P&gt;0.05)o所有标本均经病理组织学证实,患者均签署知情同意书。1.2骨髓基质细胞分离培养注射器肝素化后抽取3〜5ml骨髓,将所获得的骨髓100B钢网过滤后,平头吸管反复抽吸吹打制成单细胞悬液,采用全骨髓培养法以l&times;106/ml置于50ml培养瓶中培养,每瓶含10ml培养液置于37°C、5%CO2湿---本文来源于网络,仅供参考,勿照抄,如有侵权请联系删除---化空气的孵箱中进行原代培养。48h后半量换液,以后每48〜72h全量换液。细胞汇合度达80%左右吋提取总蛋白和总R...

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