吉林大学学报(理学版)JOURNALOFJILINUNIVERSITY(SCIENCEEDITION)研究简报荧光引物扩增AMG基因鉴定古代人骨遗骸的性别刘树柏】，崔银秋谢承志朱泓2,周慧】』（1.吉林大学生命科学学院，长春130023；2.吉林大学边鴉考古中心考古DZA实验室・长春130023）摘要：建立一种用荧光标记引物扩增AMG基因的性染色体同源片段方法，对古代人骨遗骸进行性别鉴定.用其测定5个古代遗骸的性别，其结果与形态学结果一致・关键词：性别鉴定；聚合酶链式反应；AMG基因；荧光标记引物中图分类号：Q987文献标识码：A文章编号：1671-5489（2004）01-0139・04SexidentificationofarchaeologicalhumanremainsbasedonamplificationofAMGgeneviafluorescent-labeledprimersLIUShu-bai1,CUIYin-qiu1*2,XIECheng-zhi1,ZHUHong2,ZHOUHui12.（1・CollegeofLifeScienceJilinIJniversity•Changchun130023.China；2・CenterofBorderArchaeologyAncientDNALaboratory•JilinUniversity•Changchun1300239China）Abstract:Asensitiveandreliablemethod,basedontheamplificationofAMGgenebyfluorescent・labeledprimers,wasestablishedtoidentifythesexofarchaeologicalhumanremains.Usingthismethod,thesexwasdeterminedforfiveskeletalremains,andtheresultsareconsistentwiththoseofmorphologicaljudgment・Thissensitiveandreliablemethodhasahighvalueinforensicmedicine>anthropologyandarchaeology.Keywords:sexidentification；polymerasechainreaction（P（：R）$amelogeningene；fluorescent-labeledprimers在考古学研究中，性别鉴定对重新构建古代社会的社会结构有着龜要作用.传统人类学上骨骼的性别特征一般通过形态学分析确定，然而，对于那些成人骨骸碎片和儿童或婴儿遗骸，这些常规的人类学测定方法则无法使用.对于X和（或）Y染色体上的特异序列的DNA分析可提供一个理想方法.聚合酶链式反应（PCR）是一种敏感的方法，但古代DNA研究极易受到一些无关个体（在考古地点和实验室内的）的污染、古代DNA的高度降解和不明起源的PCR反应抑制剂的存在等限制〔2】.以DNA为基础的人骨遗骸性别鉴定最早用扩增Y染色体待异序列进行⑶.如果出现特征性片段，表明个体为男性，岀现阴性结果，则常常被解释为女性，但这一结果也可能是由于DNA的保存质量不好所致・对Amelogenin基因（AMG,牙釉蛋白的编码基因）在X,Y染色体上的同源片段的差异进行扩增可以很好地解决这个问题，因为对X染色体上片段的扩增可提供一个内在的阳性对照⑶.AMG基因的第一个内含子在性染色体的同源片段中有儿处序列差异点，目前大部分性别鉴定的研究是针对其中一个189bp的删除区域⑷.然而，这个方法要求相对大量非降解的DNA模板.对于古代DNA,一个收稿日期：2003-09-03.作者简介^刘树柏（1978〜八男.硕士研究生.从爭考古DNA研究.E-mail：Liushubai^hotmail.com-联系人：周急（1954〜）.女・博士•教授.博士生导师.从爭分子进化研究.E-mail:Zhcuhui@mail.jlu.edu.cn・基金项目：国家自然科学基金特殊研究项目（批准号：J0030094）.第42卷第1期2004年1月VoL42No.1Jan2004基于扩增AMG基因小片段的PCR反应则更为合适・本研究使用一对荧光标记的待异性引物，对AMG基因的内含子1在X,Y染色体同源片段中的部分序列进行扩增，以此来鉴定个体性别•此方法灵敏度高、简便、准确，对于高度降解DNA样本的分析，比如对法医学及古代样本有很大的实用性•1材料与方法1.1材料样本由新疆文物考古研究所提供，共有5个个体的上肢骨・由于当地气候干燥少雨，样本保存良好(见表1〉・Table1TheancientsampleusedinthesexidentificationSamplesArchaeologicalnumberSiteDate(YearsBP)Gender(Bonemorphology)1Mj2Jiaoheremain2000Male2Mj2Jiaoheremain2500Male3SuIM1RSubashiremain2500Male479LQ2M3LuobunMrremain3800Male579LQM.Luobunuerremain3800Female1.2实验方法1・2・1DNA的提取先用刀片和毛刷去除骨样表面污垢，将其露在紫外光线下1h,最后打磨去表面2〜3mm.在WaringBlandor(WARING,USA)中制成骨粉.将骨粉分装于灭菌的5mLEppendorf管中，一20€贮存.DNA的提取使用GENECLEAN...