外科学(普外)专业毕业论文[精品论文]淫羊藿素减轻急性肝损伤及其分子机制研究关键词：淫羊藿素四氯化碳肝型脂肪酸结合蛋白雌激素受体急性肝损伤摘要：[研究背景与目的]淫羊藿素是近年来倍受关注的具有抗氧化、防治骨质疏松、心血管疾病、保护神经变性损伤、防治乳腺癌的单体药物。用于分离淫羊藿素的箭叶淫羊藿，自古以来是一种重要的传统中草药。淫叶藿经多重步骤的萃取与硅胶层析、洗脱后，可制得淫羊藿素。淫羊藿素与其前体物质淫羊藿苷具有极其相似的分子结构。其不同之处在于A环7位的糖苷链被羟基所代替(见图1)。从药物构效关系的角度推测其抗氧化功能将进一步增强。目前有关淫羊藿素的研究证实：1、通过降低前列腺癌细胞线粒体的跨膜电势，减少pRb、CyclinD1及CDK4蛋白的磷酸化使前列腺癌细胞阻制于G1期从而产生抑制癌细胞增殖的作用；2、原代培养神经细胞的药理研究发现，淫羊藿素可通过拟雌激素样作用引起细胞增殖，减轻β样淀粉酶对神经细胞的损伤；3、诱导胚胎干细胞分化；4、可通过抑制酪氨酸蛋白激酶的表达、减轻细胞缝隙间连接蛋白的损伤减轻血管内皮细胞的缺氧损伤；5、通过其抗氧化作用可促进成骨细胞的增殖，抑制破骨细胞，从而防治骨质疏松症。各种原因导致的肝损伤是临床工作中经常遇到的问题，肝脏保护一直是研究的热点问题。有关肝损伤保护药物的研究、基因治疗、外科干预措施等一直是较为活跃的领域之一，但仍缺乏高效的多靶点的保肝药物。肝损伤的病理过程中，活性氧簇(reactiveoxygenspecies，ROS)对细胞脂质、蛋白质、核酸的氧化作用是主要的损伤途径。结合淫羊藿素已有的研究背景，我实验室前期研究已经证实淫羊藿素可以减轻脂肪肝小鼠的缺血再灌注损伤。我们推测其可能存在减轻急性化学性肝损伤的药理作用，有望成为治疗肝损伤的治疗药物。本研究着重进行淫羊藿素瘁灭活性氧簇、拟雌激素样作用调节肝细胞细胞内氧化还原状态的体内外实验研究，初步评价淫羊藿素治疗急性肝损伤的作用，探讨其可能的分子机制。[研究方法]1淫羊藿素减轻CCL4诱导大鼠肝细胞损伤的体外实验：建立大鼠肝细胞CCL4损伤模型，以淫羊藿苷为阳性对照药物，在不同剂量淫羊藿素作用下，应用MTT法测定药物作用前后细胞存活率的变化、自动生化分析仪测定培养上清ALT、AST的含量、分光光度法测定细胞培养上清MDA、细胞内SOD的变化，荧光显微镜观察肝细胞ROS荧光强弱的变化，并对实验数据进行统计学处理。2淫羊藿素减轻CCL4诱导大鼠肝细胞凋亡的体外实验：建立大鼠肝细胞CCL4凋亡模型，以ICI182，780作为雌激素受体阻断药物，应用Westernblot方法检测不同浓度淫羊藿、不同作用时间后肝细胞PPARα和L-FABP蛋白以及BCL-2/BAX凋亡相关蛋白表达的变化、细胞免疫化学染色检测肝细胞L-FABP的表达水平、流式细胞仪及TUNNEL法检测肝细胞的凋亡比率及形态学变化，并对实验数据进行统计学处理。3淫羊藿素减轻CCL4诱导小鼠急性肝损伤的体内实验：利用去势C57BL/6雌性小鼠建立CCL4急性肝损伤动物模型。以雌激素为阳性对照药物、ICI182，780作为雌激素受体阻断药物，利用分光光度计测定血清ALT、AST的含量及肝组织MDA、SOD的变化、Realtime-PCR方法检测肝组织内PPARα和L-FABP转录水平的变化、HE组织切片染色评估肝组织损伤的差异、组织免疫化学染色测定肝组织L-FABP蛋白的表达水平、TUNNEL法检测肝细胞的凋亡比例及形态学变化，并对实验数据进行统计学处理。[实验结果]体外实验1淫羊藿素对CCL4损伤大鼠肝细胞存活率的影响：随着淫羊藿素浓度的升高，CCL4损伤后的大鼠肝细胞存活率逐渐增加，且呈浓度依赖性。但浓度上升至10μmol/L时细胞活力不再升高，呈现下降趋势。在同样浓度下淫羊藿素提高肝细胞存活率的能力大约是淫羊藿苷的两倍。2淫羊藿素对CCL4损伤大鼠肝细胞后培养上清ALT、AST的影响：淫羊藿素可减少ALT、AST的释放，在0.1uM-10uM范围内呈剂量依赖关系。淫羊藿素0.1uM，1uM，10uM组与模型组比较显著降低(P＜0.05)，淫羊藿苷10uM组与模型组比较显著降低(P＜0.01)。淫羊藿素10uM组与淫羊藿苷10uM组比较降酶作用更强，前者约为后者的两倍。3淫羊藿素对CCL4损伤大鼠肝细胞后MDA、SOD及ROS的影响：...