基于反相液相色谱的人血中茶碱浓度临床检测与分析［摘要］目的：建立快速、简便、准确、重现性好的人血中茶碱的测定方法。方法：采用HypersilODSC18(4.6mmX250mm,5um)为色谱柱，流动相为甲醇-水(25:75),内标物为咖啡因，检测波长为274nm,血清用甲醇沉淀蛋白后进行分析。结果：茶碱标准曲线回归方程为Y=0.0539X+0.038,r=0.9994(n=8),1〜40ug/ml浓度范围线性关系良好。对36例患者作血清茶碱浓度监测，临床效果良好。结论：本测定方法为临床药师指导临床有效、安全的个体化药物的使用提供了保障。［关键词］茶碱；血药浓度；RP-HPLC；个体化用药［］R927.2［文献标识码］A［］1673-7210(2011)12(a)-074-03Detectionoftheophyllineinhumanserumanditsclinicalapplicationbasedonreversed-phaseHPLCDUNWenliangl,ZHOUYu2,GAOYunjunl,BaoBeihua21.DepartmentofPharmacy,Nan激ngHospitalofTraditionalChineseMedicine,激angsuProvince,Nan激ng210001,China;2.CollegeofPharmaceutical,Nan激ngUniversityofChineseMedicine,激angsuProvince,Nan激ng210029,China[Abstract]Objective:Todeveloparapid,simple,accurateandreproduciblemethodforthedeterminationoftheophyllineinhumanserum.Methods:TheseparationwasperformedonHypersilODSC18column(4.6mmx250mm,5pim)withmobilephaseconsistedofmethanol-water(25:75),andthewavelengthfordetectionwas274nm.Thecoffeinewasusedasaninternalstandard,andmethanolwasusedtoprecipitatetheserumprotein.Results:TheregressionequationoftheophyllinewasY=0.0539X+0.038,r=0.9994(n=8).Thecalibrationcurvesoftheophyllinewerelinearovertherangeof1-40曲/ml.Theclinicalapplicationwasgoodfor36patientsthroughofthedetectionoftheophylline.Conclusion:Themethodsuppliesareasonableguideforthedruguseatindividuallevels.[Keywords]Theophylline;Serumconcentration;Reversed-phaseHPLC;Individualizedmedication茶碱是临床上最常用的平喘药之一，但茶碱的体内吸收和排泄个体差异很大，并且其有效范围窄，易产生副作用，因此监测茶碱血药浓度对临床治疗显得非常必要［1］。目前HPLC是最常用方法之一，满足临床需要，本实验结合文献［2］,建立了快速、准确、简便、经济、重现性好的茶碱血药浓度的HPLC检测方法。1仪器与试药1.1仪器日本岛津LC-10Avp高效液相色谱仪，LC-1OADVP双泵，SPD-lOAvp紫外检测器，LCsolution色谱工作站,Ts0.5/20型超声波电源，HP-01真空泵，1612-高速离心机，SK-1型快速混匀器，SC-230海尔冰箱，AL104电子天平。1.2药品与试剂茶碱(购自中国药品生物制品检定所，批号:100121-199903)＞咖啡因(购自中国药品生物制品检定所，批号：171215-200809,含量为99.9%),甲醇为色谱纯，实验用水为超纯水经微孔滤膜过滤。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱:HypersilODSC18(4.6mmX250mm,5Um)；流动相：甲醇-水(25:75)(V/V)；检测波长:274nm；流速：1ml/min；柱温：30°Co2.2茶碱标准品溶液的制备精密称取茶碱标准品4.0mg,甲醇溶解定容，配制成0.4mg/ml的储备液，临用时用超纯水稀释到相应的浓度。2.3内标溶液的制备精密称取咖啡因3.0mg,加入甲醇超声溶解定容,配制成150Ug/rnl的咖啡因溶液为内标。样品均4°C保存备用。2.4血清样本的预处理取人空白血清200ul,置于1.5ml的离心管中,取血清样本200Pl置入1.5ml离心管中，加入10ul甲醇，再加入150ug/ml的内标物咖啡因储备液10UI,混匀振荡10s,加入甲醇300Hl,混匀振荡1min,置15000r/min高速离心机离心10min。吸取上清液，抽滤后转入1.5ml的离心管中，取20ul样品进行色谱分析。2.5专属性考察按“2.4”项下血清样本处理方法处理，得空白血清、血清加对照品和内标色谱图。见图1。A.空白血清；B.血清加对照品和内标；1.茶碱;2.咖啡因图1空白血清、血清加对照品和内标的高效液相图谱由图1可见，茶碱和咖啡保留时间分别是5.6min和8.lmin,两峰分离完全，峰形良好，内源性物质对测定无干扰,2.6线性关系考察加入不同浓度的茶碱标准液（0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.20、0.40mg/ml甲醇配制）各］...