临床分离金黄色葡萄球菌生物膜相关基因的PCR分析孙凤军，枉前，夏培元（第三军医大学西南医院药剂科，重庆400038)摘要:目的确定临床分离的金黄色葡萄球菌生物膜形成能力和生物膜相关基因之间的关系，为生物膜形成的机理研究提供依据。方法96孔板番红染色法检测生物膜的形成，icaAD、icaBC、sar、agr和sigB的PCR扩增，并对产物进行测序和同源性比较。结果27株金黄色葡萄球菌中共有17株形成了肉眼可见的生物膜，其中以X387和X409两株最明显；有22株扩增出icaAD和icaBC，全部菌株扩增出sar、agr和sigB。结论ica是形成金葡菌生物膜的关键基因，但ica在形成生物膜过程中需要其他基因的协同作用。关键词：金黄色葡萄球菌；生物膜；生物膜相关基因中图分类号R378.1+1文献标识码：APCRanalysisofclinicalisolatedStaphylococcusaureusbiofilmassociatedgeneSunFeng-jun,WangQian,XiaPei-yuan（pharmacydepartmentofSouthwestHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400038,China）Abstract：ObjectthecorrelationofclinicalisolatedStaphylococcusaureusbiofilmformingabilityandbiofilmassociatedgene,Forthefurtherstudyofthemechanismofbiofilmforming.MethodsScreeningofbiofilmwasobservedin96wellplateswithsafranine;icaAD、icaBC、sar、agrandsigBwasamplified.ResultsTherewere17of27strainscouldformbiofilm,especiallytoX387andX409;icaADandicaBCwerefoundin22isolatesandsar,agrandsigBwereinall27S.aureusstrains.ConclusionIcaoperonisthekeygeneofthebiofilmformationbutitneedhelpofothers.Keywords:Staphylococcusaureus;Biofilm;Biofilmassociatedgene金黄色葡萄球菌(staphylococcusaureus)是医院感染的重要病原菌之一，也是生物膜感染常见的病原菌，在导管相关感染败血症的致病原中，金黄色葡萄球菌是最常见的致病菌之一[1，2]。形成生物膜的金黄色葡萄球菌具有高度的耐药性并能逃避免疫系统的攻击，其感染易慢性化并难于控制，因此对金黄色葡萄球菌等临床重要病原菌的生物膜形成机制的研究已成为抗感染研究领域的热点。目前对金黄色葡萄球菌生物膜的形成机制仍不清楚。初步研究显示生物膜的形成首先是由细胞壁相关因子调节的细胞表面的附着,随后细菌在sar、agr和sigB等基因的调节下[3-5]，主要通过ica操纵子表达产物共同催化合成的多糖胞间粘附素(polysaccharideintercellularadhesin，PIA)介导，细胞增殖并相互聚集成细胞团块，继而形成生物膜[6]。为了解这些可形成生物膜与未能形成生物膜的金黄色葡萄球菌中生物膜形成相关基因的存在情况，有研究对部分生物膜形成相关基因进行扩增，并进行了统计分析，但主要集中于单一基因的分析[2-5]。本实验针对生物膜形成相关基因ica、sar、agr和sigB设计特异性引物，进行多个基因的PCR分析。基金项目：国家自然科学基金(30572366)作者简介：孙凤军，男，黑龙江大庆市人，药师，主要从事细菌耐药性的研究。电话：（023）68765991，13983063642,E-mail:cm20030409@yahoo.com.cn通信作者：夏培元，E－mail：py_xia@yahoo.com.cn收稿日期：2008-09-18；修回日期：2008-10-271材料与方法1.1试验材料1.1.1菌株27株金黄色葡萄球菌（X236、X238、X239、X250、X274、X285、X318、X321、X360、X362、X364、X365、X382、X383、X385、X387、X391、X393、X409、X411、X418、X422、X425、X426、X428、X430和X431）均分离于第三军医大学第一附属医院2006年7月至2007年12月住院烧伤患者的临床送检标本，经美国产BBLCRYSTALTMAUTOREADER快速细菌自动鉴定仪鉴定。1.1.2主要试剂Promega基因组DNA抽提试剂盒和琼脂糖(AgaroseUltraPure)购自Promega公司，TaqDNA聚合酶购自TAKALA公司,DNA标准均购自天为时代科技有限公司，dNTPmix、溶菌酶和溶金葡菌酶购自上海申能博彩生物科技有限公司，引物由上海生工生物工程公司合成，测序由上海生工生物工程公司完成。EDTA(DisodiumSalt，Dihydrate)为AMRESO产品分装，购自上海生工生物工程有限公司，Trytone购自上海生工生物工程有限公司（BBI分装），番红购自OMIGA公司。1.1.3主要仪器PCR扩增仪、...