Claudin-7基因敲除对裸鼠结肠癌肝转移模型中的致癌作用

Claudin-7基因敲除对裸鼠结肠癌肝转移模型中的致癌作用赵雪峰刘福全张晓微(大连大学附属新华医院胃肠微创外科中心辽宁大连116021)【摘要】目的:研宄Claudin-7基因敲除对裸鼠结肠癌肝转移模型中的致癌作用及其前临床意义。方法:釆用Claudin-7基因敲除及基因重组质粒pcDNA6-Claudin-7基因敲除转染的HT29结肠癌细胞建立裸鼠结肠癌肝转移模型,随机分为2组,即Claudin-7敲除组和对照组。制模60天后比较两组间转移瘤形成情况,并采用免疫组织化学检测两组肝转移组织的Claudin-7表达程度。结果:Claudin-7敲除组肝质量、肝转移评分、淋巴结转移发生率、血性腹水成率、腹膜种植转移发生率、远处转移发生率明显高于对照组,两组间差异有统计学意义(p<0.05)。肝转移的组织病理学检测中,发现Claudin-7表达在两组间有显著差异,并有统计学意义(p<0.05)。生命表证实,Claudin-7敲除组生存率明显低于对照组,差异有统计学意义(p<0.01)。结论:Claudin-7基因敲除可促进裸鼠结肠癌肝转移的形成,况且Claudin-7表达可作为肿瘤转移的评价指标。【关键词】Claudin-7基因敲除裸鼠结肠癌肝转移【中图分类号】R446.5【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2014)03-0034-03【Abstract】Objective:TostudythecarcinogeniceffectsofClaudin-7geneknockdownonthelivermetastasisofcoloncancer(LMCC)nudemicemodel(NMM)anditspreclinicalresearch.Methods:After60daysofthespleeninjection,HT29coloncancercellstransfectedbyrecombinantclonevectorpcDNA6-Claudin-7geneknockdownwereusedtoestablishtheLMCC-NMM.Thetumorbearingnudemicewererandomizedinto2groups,Claudin-7knockdowngroupandScramblecontrolgroup.Inaddition,Claudin-7knockdowngroupwascancercellsinjectedintospleentostudygroupandcontrolgroup,evaluatingmetastatictumorformation,livermetastasistissueswereinvestigatedexpressionofClaudin-7proteinviaimmunohistochemistry.Results:Theliverweight,livermetastasisscores,lymphnodemetastasisrate,bloodyascitesrate,peritonealseedingrate,anddistantmetastasisrateofClaudin-7knockdowngroupweresignificantlygreaterthanthatinthecontrolgroup(p<0.05).ExpressionofClaudin-7proteinwasmarkedhistopathologicaldifferenceoflivermetastasistissuesbetweenClaudin-7knockdowngroupandcontrolgroup,anddifferencewasstatisticallysignificant(p<O.O5).LivetablesshowedthatClaudin-7knockdowngroupisinverselycorrelatedwithcumulativesurvivalofLMCC-NMM(p<O.Ol).Conclusion:Claudin-7geneknockdownmaybepromotetheformationofLMCC-NMM,andexpressionofClaudin-7asanevaluatingindexfortumormetastasis【Keywords】Claudin-7;Geneknockdown;Nudemice;Coloncancer;LivermetastasisClaudins是构成细胞紧密连接的骨架蛋白,其异常表达与肿瘤浸润和转移冇关[1】。其中,Claudin-7是Claudins多基因家族中的重要成分之一,0前认为Claudin-7是潜在的抑癌基因。近年来研究发现Claudin-7对原发癌的抑制作用之研究非常活跃,但对于转移癌的研究报道极少。为更加深入研究Claudin-7在肝转移中作用,实验构建Claudin-7基因敲除及基因重组载体,转染到结肠癌细胞,进行体内探索性实验,发现Claudine-7基因敲除可促进HT29结肠癌细胞的增殖、侵袭、迁移。在此基础上,本实验拟建立裸鼠结肠癌肝转移模型,以观察研究Claudin-7基因敲除对肝转移的促进作用及苏前临床意义。1、材料与方法:1.1材料:HT29人结肠癌细胞株购自美国ATCC细胞研究所。转染基因重组质粒pcDNA6-Claudin-7基因敲除和质粒pcDNA6(Scramble)的结肠癌细胞由本研究组构建。RPMI-1640及新生胎牛血清购自Invitrogen,免疫组织化学试剂盒购自DAKO,Claudin-7鼠抗人单克隆抗体购自SantaCruz,24只7周龄雌性BALB/c裸鼠购自大连医科大学实验动物中心。1.2方法与评估指标:1.2.1细胞培养及悬液制备:HT29人结肠癌细胞株在摄氏37°C、5%CO2,含10%血清RPMI1640培养液中传代培养,每2-3天换1次培养液。培养至80-90%融合吋,用0.25%胰酶消...

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