复宫宁对子宫内膜异位症大鼠异位内膜雌、孕激素受体表达和动情周期的影响作者：乔玉丹1张晓春周志愉施旻肖纯【摘要】目的探讨复宫宁治疗子宫内膜异位症(内异症)的作用机理。方法建立大鼠内异症动物模型，采用免疫组化SP法检测异位内膜雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)的表达和阴道涂片法观察动情周期。结果复宫宁高、中、低剂量组能显著降低异位内膜ER、PR的表达并显著改善内异症大鼠的动情周期(P《0.05)。结论复宫宁可能通过抑制异位内膜细胞ER、PR的合成而发挥治疗作用，并具有整体调节作用。【关键词】子宫内膜异位症;复宫宁;大鼠;雌激素受体;孕激素受体;免疫组织化学法Abstract：ObjectiveToexplorethemechanismofFugongning(FGN)intreatmentofendometriosis.MethodsTheratmodelofendometriosiswasestablished,theexpressionofER,PRineachgroupofectopicendometriumwasobservedbyimmunohistochemicalmethod.Estrumwasobservedbyvaginasmearmethod.ResultsAlldosesofFGNcouldobviouslylowertheexpressionofERandPRinectopicendometriumofendometriosismodelratsandamelioratetheirestrum(P《0.05).ConclusionFGNcanlimititsgrowthofectopicendometriumbyloweringtheexpressionofERandPRinectopicendometrium,andcanadjusttheratwhole.Keywords：Endometriosis;Fugongning;Rats;Estrogenreceptor;Progestinreceptor;Immunohistochemistrymethod子宫内膜异位症(内异症，EMT)是激素依赖性疾病，异位内膜的生长和维持依赖于卵巢激素的刺激，并通过雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)发挥作用。目前无一种药物能够达到根治效果，丹那唑等药物副作用大，并发症多，复发率高。在我国，使用中药治疗内异症的疗效多不够理想。中药复宫宁制剂补肾祛瘀，前期的研究显示其具有降低血清雌激素水平，诱导细胞凋亡[1，2]和增强腹腔巨噬细胞吞噬功能、升高血液T细胞数量的作用[3]，从而促使内异症大鼠异位内膜萎缩而发挥治疗作用。本实验主要采用免疫组化SP法，以探讨复宫宁制剂对EMT模型大鼠异位子宫内膜组织中ER、PR表达的影响，进一步明确其治疗机理。现报道如下。1材料与仪器---本文于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---1.1动物健康雌性SD大鼠，85只，体质量180～220g，由南昌大学实验动物中心提供，在江西中医学院病理实验室完成实验。1.2药物复宫宁制剂:由红花、蒲黄、延胡、三棱、莪术、巴戟天、菟丝子等中药经水提法制成，成人每天用量0.5g/kg。Danazol胶囊：上海医药有限公司华联制药厂生产，国药准字:H31021681，产品批号:060301。1.3试剂及仪器兔抗鼠ER、PR多克隆抗体，山羊抗兔IgG抗体-HRP多聚体及相应试剂盒为SantaCruzBiotechnologyINC公司进口分装，购自北京中杉金桥生物技术有限公司。Q550CW图像信息采集与分析系统等。1.4造模实验动物适应性饲养14d，每天同一时间阴道涂片，观察大鼠动情周期。在第3个动情期，采用自体子宫组织移植方法[4]建立EMT大鼠模型。以1%戊巴比妥钠麻醉，开腹找到子宫，切下左侧子宫角中段长约lcm，行端对端吻合术。将剥离的子宫内膜组织剪成0.5cm×0.5cm大小的内膜块，缝合在右侧子宫系膜，缝合切口。术后动物分笼单放，让其自然苏醒。常规饲养。2方法2.1分组及给药造模4周后抽取经剖腹证实造模成功的大鼠49只，随机分为5组，即：复宫宁高、中、低剂量组，丹那唑组，模型组。其中复宫宁高、中、低剂量组分别按3.0，1.5，0.75g/(kg·d)给药，丹那唑组以100mg/(kg·d)给药(相当于成人1日剂量的10倍)，模型组、空白组给予等容量生理盐水。每日灌胃1次，1ml/次。持续给药4周。用药2周后，每日上午9时阴道涂片观察各组大鼠的动情周期。2.2标本的采集与处理于末次用药24h后，1%戊巴比妥钠麻醉后，剖腹，取下异位病灶，分离周围粘连组织。取右侧子宫中段(在位内膜)1cm和异位内膜作为标本，置于10%的中性福尔马林溶液中待检。2.3异位内膜ER、PR的染色及观察标本固定48h后取出，经常规脱水、透明、浸蜡、包埋、切片(片厚3～4μm)、脱蜡、水化，采用免疫组化SP法染色。在400×视野下，选择异位内膜组织的被覆上皮含阳性物质(即核...