EdU体外标记人脂肪干细胞实验探究［摘要］目的:体外培养人脂肪干细胞(adipose-derivedstemcells,ADSCs)并行EdU标记，并通过测试标记率及标记后对细胞增殖分化的影响确定优化的标记时间及浓度组合。方法：使用分别采5uM,10uM,20nM,50uM的浓度及12h,24h进行标记标记ADSC,并以流式细胞仪精确测定标记率。挑选出各12h及24h时优化标记浓度，并进行标记后测定细胞活性，增殖及诱导分化实验。结果：P3代细胞约90%以上表达表面标记CD90+,CD105+,CD44+。基本不表达细胞表面标记CD45+,CD35+O通过各试验，得出最适浓度组合10uM,12h,对进一步研究脂肪干细胞在辅助脂肪移植中的作用具有指导意义。结论：EdU是标记方法简单有效，体外最佳标记浓度组合是10pM,12ho［关键词］脂肪干细胞；细胞治疗；EdU；干细胞标记；细胞不踪［］R622Q813.1［文献标识码］A［］1008-6455(2013)01-0043-05ExperimentalstudyontheeffectoflabelingadiposederivedstemcellswithEdUZHANGYi,WANGKe-ming,LIFa-cheng,WANGShu-激e,LITai-ying,LIUXin-hai,LIUMei-chen,ZHAOXiao-hui,---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---MA激-guang(SpecialMedicalDepartment,PlasticSurgeryHospital,ChineseAcademyofMedicalSciencesandPekingUnionMedicalCollege,Bei激ng100144,China)Abstract：ObjectivesToestablishthebestmethodandoptimalconcentrantionandoptimaltimeforlabelingADSCwiththymidineanalog,5-ethynyl-2-deoxyuridine(EdU)・MethodsADSCa/tpassage2〜4werelabeledwithEdUbydiverseconcentration(5uM,10uM,20uM,50uM)anddiversetime(12h,24h).Afterlabeled,thecellwerestainedbyALEXA-555analyzedbyfluorescencemicroscopyandflowcytometer.TheimpactofEdUonthegrowthofADSCswasexaminedbytrypanblueexclusion,methylthiazolytetrazoliuM(MTT)assayandassessmultipiedifferentiationpotentialofADSCusinginvitroosteogenicandadipogenicinduetion.ResultsLabelingwithEdUinvitrocanbeeasilyperformed,Andlabelingstemcellswiththeconcentrationof10PMwith12histheoptimalconcentrationandtime.TheoptimalconcentrationandtimeoflabelinghaslittleimpactonthegrowthofADSCoronthedifferentiationandcanthereforebeusedforADSCtrading・ConclusionThelebelingmethodwithEdUissimplebutefficacious,andtheoptimalgroupislabelingwiththeconcentrationof10yMandthetimewith12h.---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---Keywords:adipose-derivedstemcells；celltherapy；EdU；stemcelllabeling；celltracing人脂肪干细胞是存在于脂肪组织中的间充质干细胞，具有多向分化的潜能。脂肪干细胞广泛且易获取，在临床上吸脂手术后废弃的脂肪数量巨大，使用酶可以将脂肪干细胞分离出来[1-2]o脂肪干细胞应用广泛，其促血管化能力强及具有内分泌功能的优点可使其广泛用于细胞治疗、基因治疗、组织工程等，现已应用于临床前期体内移植实验[3-4]o为进一步研究干细胞移植后的疗效及其原理，对干细胞行有效的标记就显得尤为重要：通过示踪的方法，可以直观得了解移植细胞在体内存活、迁移、分布、增殖、分化、转归，得到疗效的评价及机制的推论。可以用来标记脂肪干细胞的标记物有跟多种，各有优缺点[6-7]o本实验中探讨的标记物EdU为新一代标记物，本质为核酸类似物，在细胞分裂增殖的过程中参与到核染色体中达到标记目的[8-9]。本实验以EdU标记脂肪干细胞，使用流氏细胞仪精准检测其标记效率及对标记后细胞行增殖分化能力的测定以获得优化标记条件。1材料和方法1.1主要试剂及药品：低糖DMEM培养基（葡萄糖1000mg/L,谷氨駄胺4mM/L,HyClone公司，美国），特级胎牛血清（FBS,GIBICO公司，美国），0.25%胰蛋白酶（HyClone公司，美国），平衡盐溶液（磷酸盐缓冲液，Phosphatebufferso1ution,PBS,HyClone公司，美国），青霉素-链霉素溶液（PS,青---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---霉素100U/ml,链霉素100ug/ml,Amresco公...