丙酮酸脱氢酶激酶-1在人结肠癌中的表达及意义童晶涛，梁后杰，陈建芳，江恒，谢赣丰，刘平(第三军医大学西南医院肿瘤科，重庆400038)摘要：目的检测丙酮酸脱氢酶激酹-1(pyruvatedehydrogenasekinase-1,PDKl)在人结肠癌组织和细胞中的表达。探讨抑制卩DK1对结肠癌细胞活性的影响。方法应用RT-PCR.荧光定最卩CR和免疫荧光法、血sternblot检测结肠癌组织、正常结肠组织以及4种人结肠癌细胞PDK1基因的表达情况。在【〉【)K1抑制剂(I)ichl()r()dcetdte,I)CA)的诱导下，通过MTT法观察结肠癌细胞活性。结果PDK1基因在结肠癌组织中表达较癌旁组织中高：在4种人结肠癌细胞中明显表达。抑制PDK1能抑制结肠癌细胞增殖活性，抑制效应随药物浓度"U递增，其中90mniol/LDCA的活性细胞率分别为(23.90±2.79)瓠(5.90±1.31)%、(32.82±4.50)%和(29.72±3.03)%。结论PDK1基因在结肠癌纽织和细胞中高表达，在正常结肠纽织中低表达，抑制PDK1明显抑制结肠癌细胞增殖活性，PDK1可里成为结肠癌白效治疗靶点。关键词：结肠肿瘤；糖原酵解：丙酮酸脱就稱激酶-1中图分类号：R735.3文献标识码：AExpressionofpyruvatedehydrogenasekinase-lintissueandcellsofhumancoloncancerandthesignificanceofitsinhibitionTONGJing-tao,LIANGHou-jie,CHENJian-fang,JIANGHeng,XIEGan-feng,LIUPing(DepartmentofOncology,SouthwestHospitahThirdMilitaryUniversity,Chongqing40038,China)Abstract：ObjectiveComparetheexpressionofpyruvatedehydrogenasekinase-I(PDKl)betweenthenormalandcancercolontissueofhuman,theninvestigatesignificanceofinhibitionofPDK1.MethodsThemRNAandproteinexpressionofPDKlinthetissueandcellsweredetectedbyRT-PCRandimmunofluoresceneerespectively.Dichloroacetate(DCA),aPDK1specificinhibitor,ofdifferentconcentrationswasaddedintotheculturefluidofthecoloncancercellsfor48h,thenMTTmethodwasusedtoexaminethevalidityofthese・ResultsBoththemRNAandproteinexpressionofPDK1wereobservedincoloncancertissueandcelllinesofLOVO,HT-29,SW620,LS174T,whilethatwasalmostnotseeninnormaltissue.ThecellvaliditychangedobviouslywithDCAofdifferentconcentrations・ConelusionPDKlgenemaybeaneffectivetherapeutictargetforcoloncancer.Keywords：Colorectalneoplasms;Glycolysis;pyruvatedehydrogenasekinasc-I作者简介：童品涛•女.浙江省宁海县人.侦止研究生.医师.主要从事结肠癌能竝代谢方而的研究。电话：(023)68772772通信作者:梁后杰♦E-mail:1ianghoujiefisina.com收稿日期:2009-07-10：修回日期:2009-09-23生物能量代谢有别于正常组织细胞是肿瘤细胞的一大生物学特点，长期处于缺氧状态中的肿瘤细胞习惯于主要通过糖酵解获能，即使在有氧情况下也是如此，这就是所谓的Warburg效应丙酮酸脱氢酶(pyruvatedehydrogenase,PDH)是糖酵解的关键限速酶，而PDH的活性受丙酮酸脱氢酶激酶(pyruvatedehydrogenasekinases,PDKs)调控S抑制PDK的表达而增高PDH的活性就能进入有氧氧化途径从而切断肿瘤细胞获能的主要方式，增加的氧耗继而促进了细胞的凋亡。PDKs的4个成员中PDK1的纽.织分布相对局限，表达量较低，与缺氧相关因了HIFla的关系最密切乙同时有关研究表明DCA抑制PDK1有肿瘤特异性二为此，我们检测了人结肠癌纟R织和癌旁纟fl织及细胞中PDK1的表达情况，并探讨抑制PDK1对结肠癌细胞活性的影响，以期为临床治疗提供新的靶点。---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---1材料与方法1.1标本收集本院乎术切除获得的结肠组织20例（经病理证实其中20例均为结肠腺癌）。标木选取包括肿瘤原发病灶和癌旁正常组织（作为对照组）各50〜100mg,加入lmlTrizol,冻存于-70°C冰箱备用。Dukes分期依据病理报告和外科病史资料。1.2主要试剂DMEM细胞培养液和优级胎牛血清（Gibco公司）,PBS粉（北京中杉金桥公司），膜蛋白酶、EDTA和DMS0（Amresco公司）,PDK1特异性抑制剂-肝乐（dichloroacetate,DCA）（Sigma公司），二甲基四氮哇蓝（MTT）（上海博鑫...