杞果畸形病病原菌营养体亲及性探究摘要：【目的】为了解我国杞果畸形病病原菌Fusariummangiferae的营养亲和性及营养亲和群类型，【方法】以采自四川攀枝花市和云南华坪县等不同地区和不同柚果品种的38个畸形病病原菌为材料，在含KCIO3培养基上诱导筛选。【结果】共获得抗氯酸盐、不能还原利用硝酸盐营养突变体（nit）455株，通过MM、NM、HM等3种不同氮源培养基划分出nitA、nitB、nitC、nitD4种突变类型，其中nitA出现频率最高，占总体的78.02%;nitB和nitC其次，分别占7.91%和13.63%;nitD最少，仅占0.44%。采用nit突变体互补型配对技术，将获得的突变菌株进行配对培养测得不同的营养体亲合歆VCGs瞰为5个其中VCG1内包含30个菌株,3个菌株分布在VCG2内,VCG3和VCG4内各含有2个菌株，菌株MG33单独形成VCG50【结论】我国枯果畸形病病原菌存在丰富的营养亲和群类型，分析发现F.mangiferae的营养亲和群种类和杜果品种、地理来源间无明显相关性。关键词：杜果畸形病；nit突变体；抗氯酸盐突变体;营养亲和群中图分类号：S667.7文献标志码：A文章编号：bid类群,且F.mangiferae（起初被鉴定为F.moniliforme和1009-998001206-1092-05枯果畸形病俗称簇生病、簇芽病，是一种危害杞果正常生长的世界性病害，植株感病后嫩芽、花序簇生，不能正常开花坐果，给生产造成严重的经济损失。畸形病在世界各枯果主产国普遍发生，国内该病主要分布在云南、四川海拔较高的址果晚熟地区[1-4]oSummanwar1966年首次从畸形病株成功分离出串珠镰刀胶鞄变种Fusariummoniliformevar.subglutinans,并且用柯赫氏法则证明此菌为致病菌，随着科学技术与生产的发展，研究人员陆续发现该病均是由镰刀菌(Fusariumspp.)引起的,大都属于Gibberellafujikuroi大的分别是埃及和美国。至今国内杜果畸形病主要致病F.moniliformevar.subglutinans)的地理分布最广［5・7］。然而在畸形组织中还检测到其他能致病的镰刀菌种类，已报道的主要有F.sterilihyphosum、F.equiseti、F.pallidoroseum、F.proliferatum和F.oxysporum等［8-10］oZheng等⑴］采用硝酸盐营养突变体互补型配对技术测定了多国枯果畸形病原F.subglutinans的营养体亲和群类型，74个菌株分属于7个，3个VCGs仅在一个国家发现，营养亲和群变化最mangiferae存在的营养体亲和群种类未见报导，我们对F.mangiferae硝酸盐突变体进行了筛选并对营养体亲和性进行了研究，旨在利用nit硝酸盐突变体技术，分析不同杞果品种分离的菌株、不同地理来源分离的菌株的抗氯酸盐突变体和nit突变体的诱发规律，并对菌株进行营养体亲和群（VCGs）的划分。1材料和方法1.1供试菌株从我国柚果畸形病发病区（四川攀枝花市和云南华坪县）采集簇生芽和簇生花序。采用常规组织分离法分离。将病组织表面消毒后，置于PDA平板上289恒温培养。对形态学上初步鉴定为F.mangiferae的分离物利用特异性分子检测技术进行种级鉴定，最终确定F.mangiferae分离物，具体方法参考文献[10]o获得镣刀菌38个，其编号及其来源列于表1.2供试培养基含氯酸盐培养基（KPS）:去皮马铃薯200g,蔗糖10g,KCIO330g,琼月旨20g,蒸憾水1000mLoF.noKPS培养基用于nit突变株诱导，MM、NM和HM培养基用于nit突变株的鉴别，MM培养基用于亲和性配对测定。1.3诱变nit突变株和突变型鉴别诱变nit突变体：各供试菌株在PDA上培养4d后，在菌落边缘利用灭菌的打孔器打下直径为5mm的菌饼，移植于KPS培养基平板上，每个皿均匀接种3个点，接种7个皿，259黑暗培养，以诱导nit突变株形成。5d后开始观察,在受抑制生长的菌落边缘出现呈快速生长的扇形区即为角变区用接种针在角变区挑取少许菌丝移植到MM平板上。如生长出的菌落无气生菌丝，菌丝稀薄，即可认定为nit突变体，每个突变体重复3次。将各nit突变体转移到MM培斜面上保存，供营养体亲和性测定。nit突变体类型鉴定：分别把突变体移植到MM,HM及NM3种培养基上，25°C培养3~4d,每处理重复3次。根据突变体在3种培养基上的生长情况，把筛选到的nit突变体分为nitA、nitB、nitC.nitD4种类型[12-14]O1.4nit突变株亲和性测定1.5营养体亲和群的测定从各菌株nit突变体间气生菌丝生长情况，选择强亲和力的nitA和nitB、...