内科学(心血管病)专业毕业论文[精品论文]Ghrelin和Obestatin在肥胖症中的作用及对糖脂代谢和细胞增殖的影响关键词：ghrelinobestatin肥胖症能量代谢HepG2细胞摘要：研究背景：肥胖症是新世纪全球性的重要健康问题之一，其患病率呈逐渐上升趋势。肥胖者常有胰岛素抵抗，易与糖尿病、血脂异常、冠心病、高血压病等集结出现，是糖尿病、心血管疾病发病的独立危险因素。研究肥胖症及其相关疾病的发生机制与防治，已成为当今医学研究的重点课题。Ghrelin是1999年由Koiima等在寻找生长激素促分泌剂受体(GHSR)的内源性配体时发现的一种由28个氨基酸构成的多肽。ghrelin主要通过NPY/AGRP系统促进摄食，反过来也受进食、食物的影响；ghrelin水平在肥胖时降低，体重减轻后升高，通过促进摄食、增加体重、促进脂肪合成等参与肥胖的发生发展，在机体减肥过程的代谢调节中起了重要作用，因此认为ghrelin可能参与了肥胖的病理生理机制。2005年11月斯坦福大学Zhang等推测并证实了ghrelin的前体preproghrelin除可产生ghrelin，还可产生另外一种多肽，命名为obestatin。Obestatin最初的研究发现在机体食欲和体重调节中与ghrelin的功能完全相反；而且其受体GPR39与GHSR亦属于同一家族，提示二者功能的协调发挥是机体调节一些生理功能的一个重要机制。然而，也有研究表明上述结论还有待商榷，认为obestatin不是GPR39的配体，外源性obestatin并不能影响大鼠或小鼠的体重、进食量和生长激素的分泌。我们以前的研究发现肥胖症患者外周血ghrelin和obestatin水平均明显低于正常人，进食后进一步降低。本研究主要探讨ghrelin、obestatin与肥胖症的关系及对HepG2细胞的作用。目的：探讨饮食诱导肥胖(DIO)大鼠空腹外周血ghrelin和obestatin的水平，DIO大鼠在不同摄状态下及通过迷你胃旁路手术和改变饮食后ghrelin和obestatin的变化；外源性的ghrelin和obestatin腹腔注射对DIO小鼠摄食、饮水、体重、血糖、血脂、胰岛素及瘦素等的影响；观察ghrelin和obestatin对HepG2细胞糖脂代谢和增殖的影响。方法：(1)建立Wistar大鼠肥胖和肥胖抵抗的模型，将DIO大鼠随机分为6组，分别为空腹组、饱食组、自由进食组、改饮食组、迷你胃旁路手术组和假手术组，采用RLA方法测Wistar大鼠各组外周血中的obestatin和ghrelin的水平。采用免疫组化方法测obestatin和ghrelin在组织中的表达。(2)建立C57BL/6J小鼠的肥胖模型，将肥胖小鼠分3组：obestatin组给予obestatin(10nmol/kg)腹腔注射7日，每日两次；ghrelin组给予ghrelin(20nmol/kg)连续腹腔注射7日，每日两次；生理盐水组给予生理盐水(0.2ml/只)腹腔注射7天，每日两次。检测给予obestatin和ghrelin后进食量，饮水量，体重，血糖及自主活动的变化及对血浆中leptin、血糖、胰岛素、血脂等指标的影响。(3)应用不同浓度的ghrelin(10-7～10-9mol/l)和obestatin(10-7-10-9mol/l)干预体外培养的人肝癌HepG2细胞，葡萄糖氧化酶法测葡萄糖的消耗；采用RealtimePCR技术检测ghrelin和obestatin对HepG2细胞中葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)，脂肪酸合成酶(FAS)，乙酰辅酶A羧化酶(ACC)和葡萄糖激酶(GK)mRNA的表达，Westernblotting方法检测糖原合成酶(GS)的蛋白表达及对糖原的影响；观察细胞增殖的变化，并检测信号通路抑制剂ERK特异性的抑制剂PD98059，Rho激酶抑制剂Y-27632和P13K的抑制剂Wortmannin对ghrelin或obestatin引起的细胞增殖的影响。结论：1)DIO大鼠外周血ghrelin水平明显降低，且受短期进食状态和长期能量状态的影响；obestatin水平的变化与ghrelin相似。2)Ghrelin可以明显增加DIO小鼠的进食量和体重，并升高血糖、胰岛素和胆固醇水平；obestatin对上述方面无作用。3)Ghrelin可以促进HepG2细胞内糖脂代谢的关键酶的mRNA表达，并通过抑制糖原合成酶从而抑制糖原的合成。obestatin在上述方面无明显作用。Ghrelin对HepG2细胞有促增殖作用，该作用可能与ERK和PI3K信号通路有关。Obestatin也有促进HepG2细胞增殖作用并可能与PI3K信号通路有关。总之，本研究发现obestatin对DIO小鼠进食量和体重及糖脂代谢无明显作用，对肝细胞糖脂代谢亦无明显影响，提示obestatin与肥胖的发生无明显关系...