超高效液相一质谱联用鉴定云南雪胆及云南地不容探究［摘要］目的用超高效液相-质谱联用(UPLC-MS)鉴定云南雪胆和云南地不容。方法通过UPLC-MS检测云南雪胆和云南地不容，得到其主要成分的质谱图，通过分析各离子峰得到分子量。结果云南雪胆的主要成分是雪胆甲素，云南地不容的主要成分是左旋四氢巴马汀，检测结果与文献报道结果一致，两种药材得到鉴别。结论采用UPLC-MS检测天然产物，可以在不分离纯化的前提下，快速确定其主要成分,方法可靠，结果准确。［关键词］云南雪胆；云南地不容；UPLC-MS［］RTS254.7［文献标识码］A［］1673-7210(2013)02(b)-0112-02云南雪胆(HemsleyasinesisCognofYunnan)为葫芦科(Cucurbitane)雪胆属(Hermleya)植物的干燥块根,具有清热、解毒、消肿止痛的功效，民间用来治疗肝炎、气管炎、胰腺炎、慢性子宫颈炎、带状疱疹、肿瘤等［1-5］o云南地不容(StephaniayunnanensisH.S.Lo)为防己科(Menisermaceae)千金藤属(Stephania)植物的干燥块根,具有清热、解毒、镇静、止痛、理气等功能，民间用于治疗风湿骨痛、胃痛、毒蛇咬伤等［6-7］o云南雪胆和云南地不容均为云南著名的传统中草药，民间使用较为广泛，二者均为干燥块根，从外形上看极其类似，很容易混淆，给人们的使用带来诸多不变。因此，建立一种快速检测方法，以区分两种药材是非常必要的。超高效液相-质谱联用(UPLC-MS)作为一种新的检测技术，广泛用于各种分析检测领域，它可以同时获得液相色谱和质谱图，根据离子流信息计算出化合物的分子量，分析各种离子碎片可以确定化合物的结构式，从而在样品不纯时便能知道其主要成分，这对于天然产物的研究极为重要。本研究采用UPLC-MS对云南雪胆和云南地不容进行检测，从而建立一种鉴别两种药材的快速检测方法，为研究和使用两种药材提供一定依据。1材料与仪器云南雪胆和云南地不容药材购自云南省药材公司(分别产自云南西双版纳和云南文山)，经大理学院药学院周浓副教授鉴定为葫芦科雪胆属植物雪胆HemsleyasinesisCognofYunnan和防己科千金藤属植物云南地不容StephaniayunnanensisH.S.Lo的干燥块根；标准品左旋四氢巴马汀Tetrahydropalmatine和雪胆甲素CucurbitacinIIa购于中国科学院上海药物研究所国家重点实验室；实验试剂均为色谱纯，实验用水为纯净水。电子分析天平(StartoriusCPA225D)；液相色谱/单极四级杆质谱仪(Waters,ACQUITYSQDLC/MSSystem)；C18反相柱(Waters,ACQUITYUPLCBEHC18,1.7um,2.1mmX100mm)。2方法与结果2.1供试品的制备分别将云南雪胆和云南地不容块状根粉碎，各取5g置于250mL茄形瓶中，加入95%乙醇各125mL,于80°C下水浴加热2h,滤去残渣，分别将提取液减压蒸干至无醇味。分别将提取物用甲醇溶解置于10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。溶液经0.45urn微孔滤膜过滤，即得供试品。2.2UPLC条件检测样品采用超高效液相色谱仪(Waters,ACQUITYUPLCH-classcoresystem),配有超高效液相紫外检测器(Waters,ACQUITYUPLCTUVDetector),色谱柱采用C18反相柱(Waters,ACQUITYUPLCBEHC18,1.7um,2.1mmX100mm),柱温45°Co乙月青为色谱纯(Merck,gradientgradeforliquidchromatography),水为纯净水。展开剂采用乙睛-水，从10%(V/V)到100%乙騰梯度洗脱,时间为6min[8]o2.3UPLC-MS检测采用液质联用仪(ACQUITYSQDLC/MSSystem)进行检测，单四极杆质谱检测器，ESCI离子源，电喷雾所用气体为氮气。2.4检测结果云南雪胆和云南地不容经UPLC-MS检测，结果见图1、2。图1A中，所含主要成分保留时间为2.56min,在负离子谱(图2A)中观察到负离子峰如下：561.5([M-H]-),607.5([M+C00H]-),1169.8([2M+C00H]-)。在正离子谱(图2B)中观察到正离子峰如下：503.4([M-AcO]+)1147.6([2M+Na]+)O很容易确定其分子量为562.5,与文献报道雪胆中所含主要成分雪胆甲素的分子量一致，所以确定该药材为雪胆。图1B中，所含主要成分保留时间为1.83min,在正离子谱(图2C)中观察到离子峰如下：356.3([M+H]+),357.3([M+2H12+),确定其分子量为355.3,与文献报道云南地不容所含主要成分左旋四氢巴马汀的分子量一致，确定该药材为云南地不容(云南地不容没有负离子谱)。将供试品的保留时间、质谱图与标...