食品安全地方标准动物源性食品中24种β2-受体激动剂及β-受体阻断剂残留量的测定液相色谱-串联质谱法11范围本标准规定了动物源性食品猪肉、猪肝、猪肾和牛肉中24种β2-受体激动剂及β-受体阻断剂残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于动物源性食品猪肉、猪肝、猪肾和牛肉中24种β2-受体激动剂及β-受体阻断剂残留量的测定。本标准方法的检出限：马布特罗、克仑潘特、克仑丙罗、沙丁胺醇、克伦特罗、莱卡多巴胺、溴氯布特罗、溴布特罗、奥西那林、利妥特灵、塞布特罗、苯氧丙酚胺、克仑塞罗、妥布特罗、R-美托洛尔、S-美托洛尔、马喷特罗、西马特罗、苯乙醇胺A、非诺特罗、福莫特罗、拉贝特罗、异克仑潘特、丙卡特罗均为0.1μg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法23原理样品经酶解、高氯酸沉淀蛋白，MCX柱净化和富集，选择沙丁胺醇-d3（salbutamol-d3），克伦特罗-d9（clenbuterol-d9），莱克多巴胺-d9（ractopamine-d9）为内标，液相色谱-串联质谱仪测定24种β2-受体激动剂及β-受体阻断剂的残留量。34试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1甲酸（HCOOH）：色谱纯。4.2乙腈（C2H3N）：色谱纯。4.3乙酸乙酯（C4H8O2）：色谱纯。4.4甲醇（CH3OH）：色谱纯。4.5高氯酸（HClO4）：优级纯。4.6氢氧化钠（NaOH）：优级纯。4.7氨水(NH4OH)：优级纯。4.8β-葡萄糖苷酸酶/芳基硫酸酯酶(C3H7NO2)：购买品。4.9乙酸(C2H4O2)。4.10乙酸钠（C2H3NaO2）。4.11乙酸－乙酸钠缓冲溶液（pH=5.2）。4.120.1mol/L高氯酸溶液。4.135mol/L氢氧化钠溶液。4.140.1mol/L乙酸溶液。4.155%氨水甲醇溶液。4.160.1%甲酸水溶液。4.17MCX固相萃取小柱(6mL,200mg)或其他等效柱。4.18微孔滤膜：0.22µm，水相。4.1924种β2-受体激动剂及β-受体阻断剂标准品：纯度均>95%，见表A.1。4.20同位素内标沙丁胺醇d3(salbutamol-d3)、克伦特罗-d9(clenbuterol-d9)、莱卡多巴胺(ractopamine-d5,纯度>98%。4.21标准储备液：分别称取上述24种β2-受体激动剂及β-受体阻断剂10.0mg，置于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，于4℃条件下保存。4.22混和同位素内标储备液：分别吸取各同位素内标用甲醇稀释成1.0μg/mL的混和同位素内标储备液。4.23标准工作液：分别吸取上述各储备溶液，用甲醇稀释，配成浓度为1.0μg/mL的混和标准储备溶液。根据需要,用甲醇稀释上述标准储备溶液,配制成不同浓度的标准工作液。5仪器与设备5.1液相色谱-串联质谱仪。5.2电子分析天平：感量0.1mg。5.3冷冻高速离心机（15000r/min）。5.4氮吹仪。5.5固相萃取装置。5.6超声清洗仪。5.7恒温箱。5.8涡旋混合器。6分析步骤6.1样品制备动物组织样品绞碎混合均匀，置于4℃冰箱中保存待测。6.2样品提取准确称取绞碎混合均匀的动物组织样品5.0g,置于50mL离心管中，加入乙酸－乙酸钠缓冲溶液（pH=5.2）(4.11)10mL，加入5μL的β-葡萄糖苷酸酶/芳基硫酸酯酶，50℃水解2h，加高氯酸调节pH值至1.0，在80℃超声提取30min，取出冷却至室温在8000r/min离心10min。沉淀再用10mL0.1mol/L高氯酸溶液（4.12）提取一次，合并两次提取液。用5mol/L的NaOH（4.13）调pH=4.0,以10000r/min冷冻离心，待过MCX固相萃取柱。6.3净化MCX柱用6mL甲醇、6mL水活化后，加入上述溶液过柱，弃去过滤液。依次用5mL的0.1mol/L乙酸（4.14）、5mL甲醇淋洗,弃去过滤液和淋洗液，再用6mL的5%氨水甲醇溶液（4.15）洗脱,收集洗脱液于玻璃小瓶中，氮气吹干，用5mL0.1%甲酸水溶液（4.16）定容，涡漩1min，经0.22μm微孔滤膜过滤液相色谱-串联质谱测定。6.4标准工作曲线的制备称取与试样基质相应的阴性样品5.0g，按6.1和6.2进行处理后得到基质溶液。根据需要,制备不同浓度的基质加标标准工作曲线。6.5测定6.5.1色谱参考条件色谱柱：BEHShieldRP18柱(100mm×2.1mm,1.7μm)或相当色谱柱。柱温：40℃。流动相：A相：含0.1%(体积分数)甲酸水溶液；B相：乙腈。梯度洗...