番杏TtASR基因的克隆及其抗逆功能分析叶玉妍罗鸣陈红锋张美何金实杨礼香摘要ASR（ABA，StressandRipening）蛋白是植物中特有的亲水性小分子蛋白，在植物细胞失水条件下对细胞器起保护性作用。本研究在构建番杏[Tetragoniatetragonioides（Pall.）Kuntze]全长cDNA文库中通过随机克隆测序分析基础上，获得了一个编码番杏ASR蛋白的全长cDNA序列，命名为TtASR（GenBank登录号：MH454101）。TtASR的cDNA全长序列包含一个为723bp完整开放阅读框，编码蛋白TtASR含有240个氨基酸，等电点为5.26，分子量为25.29ku。对TtASR与其他植物中同源蛋白的进化分析表明，与辽宁碱蓬SlASR和海蓬子SbASR-1亲缘关系较近。将TtASR的cDNA阅读框插入到原核表达载体pGEX6p-1中，通过转化大肠杆菌进行原核表达分析。结果表明，重组大肠杆菌菌株能表现出良好地抗逆性，特别是对NaCl、高渗透压和氧化胁迫的抗逆性增强。关键词番杏;ASR基因;逆境胁迫Q949.745.5AAbstractABA，stressandripening（ASR）proteinbelongstoaplant-specificsmallfamilyofproteinswithlowmolecularweightandhighhydrophobicity，andissupposedtoplayprotectiverolesinplantcellsunderabioticstresses.AnASRgene，designatedasTtASR（GenBankaccessionno.：MH454101），wasisolatedfromacDNAlibrarypreparedfromTetragoniatetragonioides（Pall.）Kuntzeandboththenucleotideandthededucedproteinsequenceswereanalyzed.ThefulllengthcDNAofTtASRcontaineda723bplongopenreadingframe，whichwouldencodeapeptideof240aminoacidresidueswithamolecularweightof25.29kuandanisoelectricpointof5.26.TtASRsharedahighaminoacidsequencehomologywiththeASRsfromSuaedaliaotungensis（SlASR）andSalicorniabrachiata（SbASR-1）.TheopenreadingframeofTtASRwasinsertedintotheprokaryoticexpressionvectorofpGEX6p-1andtransformedintoE.coli.TheE.colicellsundertheinductionofIPTGshowedhighertolerancetoNaCl，osmoticstressandoxidativestressthancontrolcells.KeywordsTetragoniatetragonioides（Pall.）Kuntze;ASRgene;abioticstressDOI10.3969/j.issn.1000-2561.2019.05.011番杏[Tetragoniatetragonioides（Pall.）Kuntze]又名新西兰菠菜、野菠菜、洋菠菜、白番苋，为番杏科番杏属一年生或二年生半蔓性草本植物，分布于亚热带及温带地区的滨海富盐区域，是一种具有经济价值和生态价值的盐生蔬菜[1–3]。番杏营养价值高，富含矿物质及多种维生素，营养丰富，肉质茎叶鲜嫩，口味清爽。番杏可全株入药，有清热、解毒的功效，对消化道癌症有一定的缓解和治疗作用[3]。番杏全株还含有抗菌的番杏素，是近几年我国新兴的一种很受人们欢迎的新型保健型蔬菜[2]。此外，番杏作为一种高耐盐性的盐土植物（halophyte），可耐受海水盐度，在海水倒灌引起的盐滞地区可正常生长，可用于对滨海滩涂地、盐荒地、海水倒灌农田改良和利用，是一种具有重要生态价值的经济作物[3-4]。盐土植物是挖掘耐盐遗传资源、分离耐盐基因和启动子的重要来源[5]。土壤盐渍化是我国农业生态环境退化的重要问题之一，严重影响我国农业经济的发展。土壤盐渍化不仅影响土壤的利用率及农作物的种植面积，还会引起农作物营养缺陷和产量下降[6]。通过植物遗传改良提高作物的耐盐性是现代植物分子育种的重要手段，而通过分子生物学手段发掘耐盐基因是不可或缺的工作基础。植物的耐盐分子机理可归纳为3种类型：离子外排、渗透压耐受和组织耐受[7];或者总结为两类耐受机制：渗透压耐受和离子耐受[8]。研究表明，在上述不同的耐受机理中，有几类关键的基因在提高植物耐盐性方面发挥重要的作用，这些基因主要通过介导Na+/K+吸收、转运、外排，从而缓解离子毒害，提高植物细胞渗透胁迫的耐受性[8]。已经鉴定的耐鹽功能基因主要包括离子通道蛋白、转录因子、代谢酶类及一些保护性蛋白[9]。ASR（ABA，stressandripening）基因是植物中特有的一类主要参与调控细胞耐受水分缺失的抗逆基因，通常只含有较少的基因家族成员，且编码高度亲水的小分子蛋白[10]。该类基因在包括模式植物拟南芥...