高效液相色谱法测定门冬氨酸鸟氨酸注射液的含量缪宁梅1，马婕2（1.江苏省药品检验所，江苏南京210008;2.中国药科大学，江苏南京210009摘要:目的建立高效液相色谱法测定门冬氨酸鸟氨酸注射液含量的方法。方法采用氨基键合硅胶色谱柱（4.6mm250mm,5m;以乙月青0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（5050为流动相，流速为1.0mL/min;检测波长为200nm。结果门冬氨酸与鸟氨酸都在125~2500g/mL浓度范围内有良好的线性关系（r=0.9999，两者的平均回收率分别为99.92%与100.25%,RSD分别为0.34%与0.70%。结论此法简便、快速、准确，适用于门冬氨酸鸟氨酸注射液的含量测定。关键词：门冬氨酸;鸟氨酸;含量测定;高效液相色谱法：R977.4;R927.2文献标识码：A：10051678（200701005202AssayofornitbinaspaetantinjectionbyHPLCMIAONingmei1,MA激e2(1.激angsuInstituteforDrugControl,Nan激ng210008,China;2.ChinaPharmaceuticalUniversity,Nan激ng210009,ChinaAbstractpurposeToestablishanHPLCmethodfortheassayofornitbinaspaetantinjection.MethodsTheassaywasperformedonaKromasilNH2column(4.6mm250mm,5m.Themobilephasewascomposedofacetonitrile0.05mol/LKH2PO4(5050.Theflowratewas1.0mL/min.Thedetectionwavelengthwas200nm.ResultsBothaspartateandornithineshowedgoodlinear(r=0.9999intherangeof1252500g/mL.Theaveragerecoverywas99.92%and100.25%respecttively.ConclusionThemethodmightbesimple,rapidandaccurate.Itissuitablefortheassayofornitbinaspaetantinjection.Keywords:aspartate;ornithine;assay;HPLC收稿日期：20060412修回日期：20060529作者简介:缪宁梅（1973，女，江苏南京人，主管药师，主要从事药品检验工作。门冬氨酸鸟氨酸注射液是我国首个用于临床的具有护肝、解毒、能量三效合一的新药，其主要治疗成分是门冬氨酸和鸟氨酸，临床用于急、慢性肝病的治疗，包括肝硬化、脂肪肝及肝炎所引起的血氨升高，对肝性脑病尤其有效［1］。本文参照有关文献［23］采用高效液相色谱（HPLC法，直接测定门冬氨酸鸟氨酸注射液中门冬氨酸与鸟氨酸的含量，方法简便、快速、灵敏度高、重现性好。1材料门冬氨酸对照品，中国药品生物制品检定所，批号:140691200401盐酸鸟氨酸对照品,Merck公司，批号:K29829706141;门冬氨酸鸟氨酸注射液，规格:10mL5g,南京某制药有限公司，批号:050801、050802、050803。HP1100HPLC仪（包括二元输液泵、自动进样器、柱温箱、DAD检测器，美国惠普公司。2方法与结果2.1色谱条件的选择2.1.1检测波长的确定取门冬氨酸与盐酸鸟氨酸对照品适量，加50%磷酸溶液1滴，加50%乙月青溶液溶解并稀释分别制成每1mL中约含门冬氨酸1mg和鸟氨酸1mg的溶液,DAD检测器全波长范围内进行扫描，门冬氨酸与鸟氨酸均在200~210nm波长范围内有吸收，属末端吸收。同时用200,204,210nm进行才测，基线噪音基本相同，但200nm的响应值最大，故选择200nm作为测定波长。2.1.2色谱柱和流动相的选择经反复试验，用氨基键合硅胶色谱柱（4.6mm250mm,5m;以乙月青0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（5050为流动相;流速为1.0mL/min。理论塔板数按鸟氨酸峰计算应752中国生化药物杂志ChineseJournalofBiochemicalPharmaceutics200汗第28卷第1期低于5000。在此色谱条件下，供试品及对照品的HPLC色谱图见图1。鸟氨酸与门冬氨酸及氯离子峰的分离度均大于9.0400-812400-812//mina,对照品a,Standardb.供试品b*Sample1.辅料；2.氯离子；3.鸟氨酸；4.门冬氨酸I.Stuff;2.Chlorideion;3.Aspartate;4.Ornithine图1供试品与对照品的HPLC色谱图Fig1HPLCchromatogramofsampleandreferencesubstance5.2线性关系精密称取门冬氨酸与盐酸鸟氨酸对照品适量，加50%磷酸溶液1滴，力口50%乙月青溶液溶解并稀释制成每1mL含门冬氨酸与鸟氨酸均为12.5mg的溶液。精密量取0.1,0.3,0.5,0.7,0.8,1.0,2.0mL分别置10mL量瓶中，力口50%乙月青溶液稀释至刻度，摇匀,精密量取20L,分别注入HPLC仪，记录色谱图，以峰面积(A对浓度(C作线性回归，得直线方程为：门冬氨酸A=3668.3C+58.823,r=0.9999;鸟氨酸A=1162.3C+3.100,r=0.9999。结果表明，在125~2500g/mL范...