第一章1.传统发酵：最初发酵是用来描述酵母菌作用于果汁或麦芽汁产生气泡的现象，或者是指酒的生产过程。2.生化和生理学意义的发酵：指微生物在无氧条件下，分解各种有机物质产生能量的一种方式。3.发酵：利用微生物在有氧或无氧条件下的生命活动来生产微生物菌体或代谢产物的过程。4.微生物工程的发展阶段：①天然发酵阶段：微生物的发酵开始于人类见到微生物前的一段漫长的历史时期，大约在距今8000年前至公元1700年②开拓发酵原料时期③基因工程阶段5.发酵原料的预处理：淀粉——变成糊精或葡萄糖酸水解（高压、强酸）、酶水解法第二章1.国外菌种保藏中心（1-2个）：美国典型微生物菌种保藏中心（ATCC）、英国国家典型菌种保藏所（NCTC）、日本大阪发酵研究所（IFO）、法国巴斯德研究所（IPL）2.国内菌种保藏中心（2-3个）：①普通微生物菌种保藏管理中心(CCGMC)中科院微生物所，北京：真菌、细菌中科院武汉病毒所，武汉：病毒②农业微生物菌种保藏管理中心(ACCC)农科院土壤肥料所，北京③工业微生物菌种保藏管理中心(CICC)中国食品发酵工业科学研究所，北京④医学微生物菌种保藏管理中心(CMCC)中国医学科学院皮肤病研究所，南京：真菌卫生部药品生物制品检定所，北京：细菌中国医学科学院病毒研究所，北京：病毒⑤兽医微生物菌种保藏管理中心(CVCC)农业部兽医药品监察所，北京3.菌种筛选主要步骤调查研究及查阅资料↓设计实验方案↓确定采集样品的生态环境采样↓确定特定的增殖条件增殖培养↓确定特殊的选择培养基及可能的↓定性或半定量快速检出法平板分离↓原种斜面↓确定培养条件筛选↓初筛（1株1瓶）↓复筛（1株3～5瓶）↓结合初步工艺条件摸索再复筛（1株3～5瓶）↓3～5株↓单株纯种分离↓生产性能试验↓→毒性试验菌种鉴定4.采样对象：以采集土壤为主一般田园土和耕作过的沼泽土中，以细菌和放线菌为主；富含碳水化合物的土壤和沼泽地中，酵母和霉菌较多，如一些野果生长区和果园内。5.分离鉴别（2种）：纸片培养显色法透明圈法变色圈法生长圈法抑制圈法6.真菌分离：①利用低碳／氮比的培养基可使真菌菌落分散，利于计数，分离和鉴定②有时真菌子实体形成必须有光线③加抗生素抑制细菌7.诱变育种：利用诱变剂处理微生物细胞，提高基因突变频率，再通过合适的筛选办法获得所需的高产优质菌种的方法8.诱变育种步骤：出发菌株的选择→处理菌悬液的制备→诱变处理→中间培养→分离和筛选9.菌株的选择：要尽量选择单倍体细胞、单核或核少的多细胞体来作出发诱变细胞10.中间培养：由于在发生了突变尚未表现出来之前，有一个表现延迟的过程，即细胞内原有酶量的稀释过程(生理延迟)，需3代以上的繁殖才能将突变性状表现出来。此过程称为中间培养。11.由于紫外线穿透力不强，要求照射液不要太深；由于紫外线照射后有光复活效应，所以照射时和照射后的处理应在红灯下进行12.营养缺陷型：营养缺陷型是指通过诱变而产生的缺乏合成某些营养物质如氨基酸、维生素或碱基等的能力，必须在其基本培养基中加入相应的营养成分才能正常生长的变异株。13.筛选营养缺陷型的步骤：诱变→淘汰野生型→检出缺陷型→确定生长谱14.营养缺陷型的应用：①氨基酸发酵生产②突变生成同系列抗生素③Ames试验15.防止或降低工程菌的不稳定的措施（2种）：①组建合适载体；②选择适当的宿主，相对而言重组质粒在大肠杆菌中的稳定性大于枯草芽孢杆菌和酵母；③施加选择压力，即利用某些生长条件使得只有那些具有一定遗传特性的细胞才能生长，常用方法有抗生素添加法、营养缺陷型法等；④控制外源基因过量表达，外源基因表达水平越高，重组质粒往往越不稳定；⑤控制培养条件，这是工业化生产的关键步骤；⑥将质粒上的不需要的DNA去除.16.原生质体融合：通过人为的方法，使遗传性状不同的两个细胞的原生质体进行融合，以此获得兼有双亲遗传性状的稳定重组子的过程17.原生质体的制备：原生质体的制备主要是在高渗压溶液中加入细胞壁分解酶；在放线菌和细菌中，制备原生质体主要采用溶菌酶；酵母和霉菌一般可用蜗牛酶或纤维素酶等。第三章1.对于放线菌或霉菌产孢子培养基，氮源和碳源不宜太丰富，否则容易长菌丝而...