过表达人抗菌肽LL37腺病毒构建及转染阴道上皮细胞

过表达人抗菌肽LL37腺病毒构建及转染阴道上皮细胞申复进,许学先,周利梅(武汉大学人民医院妇3科,湖北省武汉市430060)引用本文:申复进,许学先,周利梅.过表达人抗菌肽LL37腺病毐构建及转染阴道上皮细胞屮闲组织工程研究,2016,20(51):7697-7702.DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.2016.51.015ORCID:0000-0002-5195-8628(申复进)文章快速阅读:文题释义:抗菌肽:原指敁虫体內经诱导而产生的一类具打抗菌活性的碱性多肽物质,相对分子质罱4:2000-7000,由20-60个鉍基酸残基组成。这类活性多肽多数具冇强碱性、热稳定性以及广谘抗萌等特点。111:界上笫一个被发现的抗菌肽的是1980年山瑞典科学家G.Boman等人经注射阴沟通杆菌及大肠杆菌诱导惜古比天蚕蛹产生的具冇抗苘活性的多肽,定名为Cecropinso腺病毒:是一种没有包膜的直径为70-90nm的颗粒,由252个壳粒呈廿诎体排列构成。衣壳里足线状双链DNA分子,腺痫毒分W个属,共约100余血清型。-•般会造成呼吸系统的不适,对啮齿类动物有致癌能力,或能转化体外培养的啮齿类动物细胞,但对人体不出现致癌性。摘要背景:LL-37作为唯-•存在人体的抗微生物肽,不仅能促rt皮细胞增殖,而H具冇较强的促进血管少成能力,在组织修复初期的血管生成屮起重要作用。目的:构建过农达人抗苘肽LL37基因的重组腺痫靑,体外转染犬叨道上皮细胞,检测抗荫肽LL37的表达和分泌情况。方法:PCR法扩增LL37基因片段,构建融合绿色荧光蛋白(EGFP)和LL37的重组腺病靑表达质粒,限制性切酶酶切和测序法鉴定构建的甫组腺病毐表达质粒,采川HEK293包装后反复冻融扩增、纯化过表达LL37的腺病靑,终点稀释法检测腺病靑滴度。体外分离培养犬阴道上皮细胞,转染过表达LL37腺病毒,分别于转染后1,2,3,5和7d采用荧光显微镜观察细胞转染情况,ELISA法测定细胞培养上清液中LL37的分泌表达情况。结果与结论:①限制性内切酶酶切鉴定勾DNA测序证实成功构迚了GV314-LL37腺病毒表达载体,包装纯化后腺病靑滴度达到3x109pfu/mL;②犬阴道上皮细胞可在体外成功分离培养并稳定传代:③过表达LL37腺病毐讨高效转染阴道上皮细胞,转染24h后荧光®微镜下即可见绿色荧光蛋D表达,随吋间延氏表达逐渐增强,转染72h时表达坡强,转染效率达89%:④ELISA证实阴道上皮细胞转染过表达LL37腺病毐后表达分泌LL37,转染后细胞培养上洁屮LL37表达禄:®荠尚于交0组,表达呈时间依赖性,转染3d表达诚强,转染后7d仍持续分泌表达;⑤结果说明,成功构建了过表达人抗菌肽LL37基冈的®组腺病毐,转染犬阴道上皮细胞后高效表达分泌LL37,为构述具介抗感染能力和促血管生成的功能性纟n.织工程化阴道奠定了基础。关键词:组织构建:姐织工程:抗萌肽•.LL37:阳道上皮细胞:腺病毒;转染:阴道:组织工程;国家H然科学基金过表达人抗菌肽LL37基因的重组腺病毒体外转染犬阴道上皮细胞:抗菌肽LL37的表达和分泌«休名称觴果HEK293乜装后反以冻融扩増、纯化过表达LL37的腺病毐体外分离培奍犬阴道t皮细胞,转染过农达LL37腺病海结果说明•.(1)成功构建了过表达人抗谢肽LL37基因的重组腺病毒,转染犬阴道上皮细胞后岛效表达分泌LL37。⑵为构违具竹抗感染能力和促血赞生成的功能性组织工程化阴道赀定f基础。申复进,男,1978年生,湖北省京山县人,汉族,2008年武汉大学外科学毕业,博士,副主任医师,主要从事女性泌尿生殖系组织工程研究。:R318文献标识码:B义章编3:2095-4344(2016)51-07697-06橘件接受:2016-09-26主题词:阴道•’上皮细胞•,抗菌肽;组织T程基金资助:国家然科学基金青年项闩傳1100395)ConstructionofarecombinantadenovirusoverexpressinghumanantimicrobialpeptideLL37geneanditstransfectionintovaginalepithelialcellsShenFu-激n,XuXue-xian,ZhouLi-mei(FirstDepartmentofGynecology,RenminHospitalofWuhanUniversity,Wuhan430060,HubeiProvince,China))AbstractBACKGROUND:LL37,theonlyantimicrobialpeptideofthecathelicidinfamilyidentifiedfromthehuman,notonlypromotestheproliferationofendothelialcells,butalsoplaysanimportantroleinangiogenesisandre-epithelialization.OBJECTIVE:Tocons...

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