组织工程骨-软骨复合组织种子细胞的获取与培养组织工程骨-软骨复合组织种子细胞的获取与培养［摘耍］目的：探索体外培养组织工程骨-软骨复合组织种子细胞的条件，并观察其部分生物学活性。方法：釆用机械-酶消化法对3周龄新西兰大白兔耳软骨和关节软骨消化来获得软骨细胞，采用全骨髓贴壁法来获得骨髓间充质干细胞，对两种细胞进行原代和传代培养，通过倒置相差显微镜观察细胞形态、绘制生长曲线、免疫组化染色等对细胞进行生物学特性分析。结果：原代培养的软骨细胞以多角形或三角形为主，传代3次以后出现去分化。形态学和免疫组化显示细胞3代以内可以保持表型稳定，具有较强的增殖及分泌细胞外基质的能力，而且耳软骨及关节软骨细胞在实验中没有表现出明显的生物学差别。采用贴壁筛选法获得的BMSCs呈长梭形或多边形，生长曲线呈形，1【型胶原免疫组化染色阳性，细胞生长增殖能力旺盛。结论：体外分离培养的软骨细胞和骨髓间充质干细胞符合组织工程耍求，能够作为骨-软骨复合组织的种子细胞。［关键词］组织工程；骨髓间充质干细胞；软骨细胞；种子细胞［］Q813.1［文献标识码M［11008-6455(2012)05-0748-04ObtainmentandcultureofseedingcelIsoftissueengineeredosteochondralcompositesLIUPengl,FUChong-激anl,DENGTian~zheng2,JTANGMingl,LI激-guol,YUShu-juanl,ZHUGuo-xiongl(1.DepartmentofStomatology,激nanGeneralMilitaryHospitai,激nan250031,Shangdong,China;2.DepartmentofStomatology,GeneralHospitaloftheAirForceofPLA)Abstract:ObjectiveToexploretheoptimizedconditionsforisolationandcultureofseedingcellsofosteochondralcompositesandobservesomebiologicalfeaturesoftheseedingcells・Methods3-week-oldNewZealandWhiterabbitswereselectedforBMSCsandchondrocytesiso---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---lationandculture・Articularcartilagecellswereobtainedbymechanical-collagenasedigestion・BMSCsweresaparatedusingwholemarrowculturemethodandpurifiedbyattachmentmethod・Morphologyandgrowthcharacteristicswereobserved・ResultsThecultivationofcartilagecellspresentedwithpolygonalortriangle,morphologyandimmunohistochemistryshowedthatstablephenotypecouldbemaintainedwithinthreegenerations,andthebiologicalcharactersofchondrocytesfromearsorjointswerealmostthesame・BMSCsdevelopedaspindleorpolygonalappearance,growthcurvewasS~shaped,expressionoftypeIIcollagenwaspositive・AdhesiveculturemethodwasprovedtobeaneffectivemethodtoprovidealargenumberofBMSCs.ConclusionThechondrocytesandBMSCsaresuitablefortissueengineering,andthesecanbeusedasseedingcellsofosteochondralcomposites・Keywords:tissueengineering;bonemarrowstemcells;chondrocytes;seedingcells骨-软骨复合组织主要存在于关节、肋骨等区域，尤其是颍下颌关节、膝关节等运动关节，并承担着重要的功能。各种原因导致的关节软骨缺损是常见疾病，由于关节软骨自身修复能力有限，目前无特效治疗方法［1］O近年来组织工程的发展为治疗软骨缺损带来了良好的前景［2］。种子细胞、支架材料和生长因子是组织工程的三大要素，种子细胞的选择是组织工程化骨-软骨复合组织构建的前提。本研究选择了软骨及骨髓的细胞，通过对软骨细胞和骨髓间充质干细胞(Bonemarrowmesenchymalstemcells,BMSCs)的分离方法、培养条件及生长测定，来建立一种快速、简便、可靠的种子细胞分离培养方法，为下一步实验打下基础。1材料和方法1.1实验动物和实验分组3周龄新西兰大口兔，雄性，体重0.4kg,由济南军区总医院实验动物中心提供。根据取材部位不同分为：耳软骨组（A）,关节软骨组---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---（B）,BMSCs组（C）o1.2兔软骨细胞的分离和培养动物麻醉处死后，无菌条件下切取双侧耳廓，分离含完整关节的四肢长骨，剥去皮肤及软骨膜，剪成小米粒大小软骨粒，磷酸盐缓...