细胞角蛋白19在乳腺癌阴性前哨淋巴结中的表达及临床意义张红丹吴旦平汪波商江峰陈颖苏文捷宋佳(苏州大学附属常熟市第一人民医院215500)【摘要】口的：探讨细胞角蛋口19在乳腺癌阴性前哨淋巴结转移屮的预测价值以及RT-PCR检验的临床意义。方法：选取我院手术治疗的51例原发性乳腺癌患者，均在手术后对前哨淋巴结与非前哨淋巴结进行病理检测，并应用免疫组化与RT-PCR检测细胞角蛋口19的表达。结果：RT-PCR检验显示细胞角蛋口19阳性表达22例，免疫组化检验显示细胞角蛋白19阳性表达21例，两种检验方式比较无明显差异(P>0.05),但均好于HE染色常规病理检查结果(P<0.05)。结论：细胞角蛋口是乳腺癌疾病屮具有较高特异性的标志物，而RT-PCR是临床检验的有效方式，临床开展检验能够提高微转移灶的检出率。【关键词】乳腺癌细胞角蛋白19前哨淋巴结【屮图分类号】R737.9【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2014)18-0253-01细胞角蛋白19主要是上皮细胞单抗，在乳腺癌细胞与健康乳腺细胞屮均存在表达，但淋巴细胞中无表达，是临床开展上皮肿瘤转移检测的有效标志物Z—⑴。RT・PCR是当前临床广泛应用的检测方法，具有较高的特异性与敏感度[2],可有效辨别淋巴结、血液与骨髓中的微转移灶⑶。本次研究针对51例患者通过免疫组化与RT-PCR方式检测细胞角蛋口19表达状况，并探讨该标志物对前哨淋巴结转移的预测价值，现报道如下。1资料与方法1.1一般资料选取我院2012年1月至2014年1月手术治疗的51例原发性乳腺癌患者,肿瘤均单发,肿块直径为1.2~3.8cm。样本年龄36〜72岁,平均---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---(53&plusmn;4.1)岁；浸润性导管癌47例，导管内癌伴随微浸润4例。所有样本均采用乳腺癌改良根治术。1.2入选标准①既往不存在腋窝手术史；②体格检查中锁骨与腋窝部位为触摸到明显肿大的淋巴结；③既往无辅助化疗史。1.3方法1.3.1前哨淋巴结定位与取材方法手术开展前采用亚甲蓝(江苏济川制药公司)开展定位，将药物沿乳晕周围或肿块边缘乳腺向乳晕部开展皮下注射［4］。然后常规开展手术，待15min后，将皮瓣游离于腋窝部位观察蓝染淋巴管所连接的淋巴结，确定前哨淋巴结位置后将其去除。应用手术刀片将获取淋巴结切分至2半，其中1份采用液氮冷冻，随后给予细胞角蛋白19的相关检测，另「份开展常规病理检查。1.3.2细胞角蛋白19的检验方法本组患者均应用免疫组化与RT-PCR检测细胞角蛋白19的表达情况。©RT-PCR：选用invitrogen公司生产的Trizol,并有效提取总RNA。将lOOmg组织样本放置于匀浆器中，添加2mL的Trizol对匀浆进行冷冻5min,然后增加0.2mL氯仿振荡15s,放置3min后，应用离心机获取上清液［5］。再增加0.5mL异丙醇放置60min,应用离心机后弃上清，采用ImL乙醇进行洗涤沉淀,再经离心弃上清，而后风干沉淀获取RNA并置于・80°C环境中进行储存。应用琼脂糖凝胶电泳对RNA样本开展检测，记录RNA浓度并应用cDNA合成试剂盒完成转录合成。在有效反应条件下置于42°C环境中反应lh,然后在99°C环境下进行5min加热，最后迅速冷却为4°C,获取cDNA,并开展PCR扩增。再将10&mu;L扩增物加入琼脂糖凝胶中开展电泳，利用紫外透射仪进行结果观察，依据电泳条带的实际亮度和内参的比较值来总结基因表达。②免疫组化法：将所有样本的石蜡标本进行切片，厚度为4&mu;m,间隔为25&mu;rm选用福州迈新生物技术有限公司僧产的CK19试剂盒，依据说明书要求---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---具体开展操作。细胞角蛋白19主要在胞浆表达，如若标本胞浆中存在棕黄色颗粒便表示为阳性，不存在棕黄色颗粒便表示为阴性。1.4统计学方法采用SPSS13.0软件进行分析，组间差异采用X2检验，P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1常规病理检验及前哨淋巴结检出情况本组51例患者共取出660枚腋窝淋巴结，人均12.9枚；共取出88枚前哨淋巴结，人均1.73枚。在常规病理检查下显示17例存在腋窝淋巴结转移,其中15例为前哨淋巴结阳性者，而前哨淋巴结与非前哨淋巴结均阳性者8例，前哨淋巴结阳性而非前哨淋巴结阴性者7例，前哨淋巴结阴性而非前哨淋巴结阳性...