基于一氧化氮释放的芦荟大黄素体外抗炎作用机制探讨#胡泊洋，张海，陈小睿，王平**510152025（成都中医药大学药学院，成都611137）摘要：目的：以LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型，探讨芦荟大黄素的抗炎作用机制。方法：以不同浓度（5μM、10μM、20μM）的芦荟大黄素预处理细胞1h后，给予1μg/mL的LPS诱导24h。以Griss法检测NO的生成量，以WesternBlot方法检测iNOS蛋白表达，以qRT-PCR方法检测iNOSmRNA表达。结果：芦荟大黄素个剂量组可显著抑制NO的释放（P<0.01），iNOS蛋白的表达（p<0.01，P<0.001），iNOSmRNA的表达（P<0.05，P<0.01），且均呈现剂量依赖性。结论：芦荟大黄素具有较好的抗炎活性，可抑制一氧化氮的释放，该活性通过抑制一氧化氮合酶的转录表达发挥作用。关键词：芦荟大黄素；RAW264.7巨噬细胞；炎症；一氧化氮合酶中图分类号：R285.5错误！未找到引用源。错误！未找到引用源。ThemechanismofAloe-emodinanti-inflammatoryeffectinvitroHuBoyang,ZhangHai,ChenXiaorui,WangPing(ChengduUniversityofTraditionalChineseMedicine,Chengdu611137)Abstract:Objective:Toexploretheanti-inflammatorymechanismofaloeemodininLPS-inducedRAW264.7cells.Methods:RAW264.7cellstreatedwith1μg/mLofLPSfor24hafterpretreatedwithaloe-emodinfor1hwhichisthreeconcentrations(5μΜ,10μΜ,20μΜ).TheamountofNOwasdetectedbyGrissassay.WesternBlotmethodtodetecttheexpressionofiNOSproteinandtheexpressionofiNOSmRNAwasdetectedinqRT-PCR.Results:Aloe-emodinsignificantlyinhibitedthereleaseofNO(P<0.01),theexpressionofiNOSprotein(P<0.01,P<0.001),theexpressionofiNOSmRNA(P<0.05,P<0.01)inadose-dependentmanner.Conclusion:Aloe-emodinhasexcellentanti-inflammatoryactivity,andthemechanismdependsoninhibitthetranscriptionalactivityofiNOS.Keywords:Aloe-emodin；RAW264.7macrophage；inflammation；induciblenitricoxidesynthase300引言芦荟大黄素(aloe-emodin)是一种游离蒽醌类化合物，为大黄、决明子、番泻叶、虎杖、芦荟等中药中主要活性成分[1]，在罗汉果、白花蛇舌草等中亦有分布[2]。现代研究发现，芦荟大黄素对葡萄球菌、链球菌及白喉、枯草、炭疽、痢疾等杆菌具有抑制作用[3]；具有一定3540的抗肿瘤作用，可通过抑制肿瘤细胞增殖并诱导细胞凋亡[4]；芦荟大黄素还有利于减轻平滑肌细胞增生，从而减轻导致动脉损伤后再狭窄的内膜增生病变的形成[5]；另外还具有泻下作用；但芦荟大黄素对炎症反应，尤其是对炎症因子的影响方面的研究相对较少。现代研究表明，多种疾病的发病机制均涉及炎症反应，如类风湿性关节炎，败血症，癌症等，因此，抑制炎症反应，将成为治疗炎症相关疾病的重要早期治疗手段。内毒素(LPS)是G-菌的胞壁脂多糖，常见的致病原，可刺激体内多种细胞合成释放多种内源性生物活性因子，从而导致全身性炎症反应的发生。LPS诱导的RAW264.7小鼠巨噬细胞模型，因为模型制备简单，被广基金项目：高等学校博士学科点专项科研基金(20105132120003)作者简介：胡泊洋(1989-),女,硕士研究生,中药药理与毒理通信联系人：陈小睿（1980-），女，副教授，中药药理.aphroragabriel@163.com-1-泛用于体外炎症反应的研究。因此，本研究以LPS诱导RAW264.7细胞释放NO为指标，考察芦荟大黄素的抗炎作用机制。1材料451.11.2细胞RAW264.7巨噬细胞株，购于中国科学院上海生命科学研究院细胞库。实验药物与试剂芦荟大黄素由成都曼斯特公司提供（HPLC≥98%）。精密称取一定量的芦荟大黄素，用DMSO配制成50μΜ的母液，于4℃冰箱中保存。内毒素(LPS)，Sigma.，批号：100M4095，5055用PBS配成1mg/ml的储备液，分装后-20℃保存；BAY11-7082，碧云天生物技术研究所，批号：S1523，量取一定量的BAY11-7082，用DMSO配制成10mM储备液，分装后-20℃冰箱避光保存；DMEM高糖培养液和胰酶（不含EDTA），美国GIBCO公司；Hyclone胎牛血清，赛默飞世尔生物化学制品（北京）有限公司，批号：NWA0362；PBS，成都哈里生物公司；一氧化氮试剂盒，碧云天生物技术研究所；qRT-PCR...