焦磷酸测序定量检测宫颈组织LMX1A基因甲基化水平的临床意义王立锋1朱昊平2夏子茵1徐军1通讯作者1.上海市闵行区屮心医院妇产科上海201199；2.上海市计划生育科学研究所上海200032【摘要】目的：检测LIM同源盒转录因子X基因(LMX1A)基因在不同程度病变组屮宫颈组织屮的甲基化水平，评估其作为宫颈上皮细胞癌变的分子标志物的诊断价值。方法：使用焦磷酸测序法检测每个抑癌基因的甲基化情况。比较正常组织和不同程度病变组织的甲基化水平的的差异。采用利用受试者工作特性曲线(ROC)确定癌变组与非癌变组Z间的判别临界值。结果：宫颈癌中的LMX1A基因6个位点的甲基化平均水平为14.36%,明显高于HG・CIN病变的4.70%、LG-CIN病变的5.05%和NLM的4.53%(P<0.01)。检测LMX1A基因甲基化甲基化鉴别宫颈癌的ROC曲线下面积分别为0.603,敏感度与特异度Z和的最大值所对应的界定值为10.66%,诊断浸润性宫颈癌的的墩感度为37%、特异度95%。结论：定量分析宫颈组织屮LMX1A基因甲基化将有可能作为分子标志物用于浸润癌的鉴别中。【关键词】LIM同源盒转录因子1Q基因；DNA甲基化；宫颈癌；焦磷酸测序法【中图分类号】R737.33【文献标识码】B【文章编号】1674・8999(2015)8-0243-02QuantitativeanalysisofLMX1AmethylationfordifferentiationoncervicalcancersandprecursorsWangLifng1,ZhuHaoping2,XiaZiyinl,XUJunl*,(1.DepartmentofObstetrics&Gynecology,CentralHospitalofMinhangDistrict,Shanghai,201199,China)(2.ShanghaiInstituteofPlannedParenthoodResearch,Shanghai,200032,China)Correspondenceto:XuJunE-mail:xujun1958@hotmail.comFundedby:ShanghaiHealthBureauProject(20114152)［Abstract］Objective:ToestimateaquantitativemeasureofLMX1Amethylationindetectionofcervicalcancer.Methods：ThepercentageofLMX1Amethylationwastestedbypyrosequencingindifferentleveloflesions.TheefficacyofLMX1AindiagnosisofcercicalcancerwastestedbyROCcurve.Results：ThemeanmethylationvalueoftheLMX1AgeneinICCwere14.36%,significantlyhigherthanthatinHG-CIN(4.70%),LG-CIN(5.05%)andNLM(4.53%)(P<0.01).TheareaundertheROCcurve(AUC)was0.603forLMX1AgenemethylationTheoptimalcut-offvalueforLMX1Agenemethylationwassetat10.66%withthesensitivityof37%andspecificityof95%.Conclusion：QuatitativemeasurementofLMX1Abypyrosequencingincervicalcanerscrapingishighlysensitiveanditmayhaveapotentialvaluefordiagnosisofcervicalcancerinclinic.［Key-words］LMX1A;DNAmethylation;Cervicalcancer;Pyrosequencing宫颈癌的发病率和死亡率分别居于女性恶性肿瘤的第三位和第四位［1］。我国研究表明，若无有效干预，国内宫颈癌的年均新发病率将由2010年的27,000致130,000上升至2050年的42,000致187,000⑵。高危型(HR)人类乳头状瘤病毒(HPV)的持续性感染是宫颈癌的病因［3,4］。宫颈上皮的癌变过程中DNA甲基化是最常见的表观基因改变，常常发生于肿瘤抑制基因的启动子区域，造成该基因的转录失活,使肿瘤发生。约70-100%的宫颈癌中可检测到DNA甲基化,U可见于约30-80%的宫颈癌前期病变中［5］。LIM同源盒转录因子la基因(LMX1A)是LIM同源盒基因家族的一员,近年来，越来越多的研究发现其表达失活和肿瘤的发生发展有关。该基因在宫颈癌、卵巢癌及头颈部肿瘤中因启动子甲基化而表达失活，提示其为抑癌基因。我们以往采用甲基化特异PCR(MSP)的方法检测了CDHl、pl6、SOXl、RASSFAl基因在宫颈癌前期病变和宫颈癌中的甲基化状态［6-10］,本研究进一步采用焦磷酸测序技术定量(Pyrosequencing)分析正常宫颈、宫颈低级别病变，宫颈高级别病变以及宫颈鳞癌的脱落细胞中LMX1A基因的甲基化水平，以期探讨LMX1A基因甲基化定量检测在区分各级别宫颈病变中的潜在临床价值。1材料和方法本研究标本收集吋间为2011年1月至2013年4月，研究地点为上海市闵行区中心医院妇科门诊，收集研究对象的宫颈脫落细胞(经液氮保存)进行抑癌基因检测，同吋留取对象宫颈组织进行病理学诊断并以此作为金标准。所有对象均排除妊娠、其他...