期刊文献奶牛常见传染病的生物学基础和诊断方法1李艳华刘振君丛慧敏北京奶牛中心，北京100192我国是奶牛养殖大国，2010年全国奶牛优势区域的奶牛存栏数已达到1400万头，奶产量居世界第三，但单产水平仅排在世界第十五位，除品种和饲养管理等因素外，奶牛疾病也是制约我国奶业发展的重要因素之一。在奶牛各种传染性疾病中，口蹄疫、布病(布鲁氏菌病)与结核病危害最为严重，均为人畜共患病。近年来，这些传染病的流行呈明显上升趋势，严重威胁着奶业生产和人类自身安全健康，研究奶牛传染病的发病机制和诊断方法具有重要意义，本文就以下几种奶牛常见传染病的生物学特点、遗传机制以及实验室诊断方法等进行综述。1口蹄疫(FootandMouthDisease，FMD)口蹄疫是由口蹄疫病毒(FMDV)引起偶蹄类动物感染的一种急性、烈性、接触性传染病，主要危害猪、牛、羊等70种家畜和野生动物，人也易感，对畜牧业危害极大（丁耀忠等，2009）。口蹄疫病毒（FMDV）被认为是最重要的经济兽医病原，是因为其高度传染性的性质和该病毒已对养殖业造成的破坏性影响。根据它的特点，口蹄疫被世界动物卫生组织(OIE)定为一类传染病，我国农业部也将其列为一类传染病。FMDV粒子呈球形，正20面体立体对称，无囊膜，完整病毒含有单股正链RNA及衣壳蛋白，并含有少量装配过程中夹带的非结构蛋白和宿主肌动蛋白(殷震等，1997)。病毒衣壳由4种结构蛋白即VP1、VP2、VP3和VP4各60个拷贝组成，其中VP1和VP3是主要免疫性抗原。口蹄疫病毒共有7个血清型：A、O、C、SAT1、SAT2、SAT3、Asia1型，各型间无交叉反应，每个型又可以进一步分为不同的亚型（张亮等，2009）。FMDV基因组全长约8.5kb，由5′端非编码区(5′-UTR)、开放阅读框(ORF)和3′-UTR及Poly(A)尾巴组成。ORF由L基因、P1结构蛋白基因、P2和P3非结构蛋白基因以及起始密码子和终止密码子组成，长约6.5kb，编码一个大的聚合蛋白（刘庆军等，2005）。由于该病毒亚型多、抗原变异性强、宿主范围广等原因，所以为奶牛疫病的诊断和防控增加了难度。根据临床症状即可对FMD作出初步诊断，但FMD与其它水泡性疾病特别是猪水泡病(SVD)、水泡性口炎(VS)、水泡性疹(VES)在临床症状上极为相似，因此必须进行实验室诊断以确诊。口蹄疫的实验室诊断主要包括病原学检查、血清学诊断技术与分子生物学诊断技术。在病原学检查方面，对口蹄疫的诊断主要依靠动物试验、细胞培养。血清学诊断技术包括病毒中和试验（VN）、补体结合试验、凝集试验、免疫扩散、酶联免疫吸附试验(ELISA)等，其中，VN是世界动物卫生组织推荐的检测FMDV抗体的标准方法，这一方法必须使用活病毒，非普通实验室所能操作，而且不能区分自然免疫和人工免疫。ELISA试验检测口蹄疫具有特异、敏感、快速、简便、可靠性好等特点，已成为国际上检测FMD的常规方法之一。3ABC-ELISA方法能区分自然免疫和人工免疫，在实验室诊断中广泛应用。对未见水泡只有疑似斑痕残留，或无明显症状的亚临床感染及康复动物是否带毒情况用传统方法很难准确判断。随着分子生物学的发展，对口蹄疫的诊断从细胞水平发展到分子水平，国内外相继建立了口蹄疫核酸杂交、反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、核酸序列分析等分子生物学诊断技术，这些方法比传统诊断方法具有更高的敏感性和特异性，有效弥补了传统方法的不足，但由于临床采集的样本成分复杂，可能含有与目的片段相似的序列，这样就产生假阳性扩增产物。生物传感器作为一种高新技术检测手段已被列为重点研究和发展的新技术，可应用于口蹄疫、禽流感等重大传染病的检测和快速诊断。基因芯片是快速、高效、高通量和自动化的核酸分析手段，可测出10pg/L的样品，能对上百个基因片段或多种病毒进行同步检测并且得到1中图分类号：S856.1文献标识码：A期刊文献样品中的生物学信息，但成本高，广泛推广显然是不可能的（Liangetal.，2005）。目前，虽已建立和应用于口蹄疫的诊断方法很多，但对FMD的诊断仍然依赖于传统的流行病学并结合新的生物诊断技术。能否发展一种集生物学试验、生物传感器和基因芯片技术的优势，具有良好的通用性、敏感性和稳定性的诊断方法，是目前学者探索的问题和挑战。2牛布氏杆...