葡萄霜霉病拮抗细菌N6的分离、筛选及鉴定摘要：筛选葡萄霜霉病菌的拮抗菌株，为该病害的牛物防治提供更多的资源。采用稀释平板分离法，从3个品种的健康葡萄叶片上分离得到细菌153株。初筛采用平板对峙法，得到5株拮抗辣椒疫病菌的菌株。采用叶盘法进行复筛，得到防治葡萄霜霉病效果好并口.稳定的菌株N6,其防效达到74.2%o通过对菌株N6的形态、生长特性、生理生化反应、16SrDNA序列测定和系统发育分析，鉴定该菌株为砖红微杆菌(Microbacteriumtestaceum)o关键词：葡萄霜霉病菌菌株；拮抗细菌；分离；筛选；鉴定砖红微杆菌(Microbacteriumtestaceum):S432.6文献标识码:A:0439-8114(2014)17-4063-03Isolation,ScreeningandIdentificationofAntagonisticBacteriaStrainN6AgainslGrapeDownyMildewGUO激-pingl,2,MAGuang2,ZHUHui-xia2,LIUChang-yuan3,FUJun-fanl(1.CollegeofPlantProtection,ShenyangAgriculturalUniversity,Shenyang,110161,China；2.DepartmentofLifeScience,liengshuiUniversity,Ilengshui053000,Hebei,China；3.TnstituteofPlantProtection,LiaoningAcademyofAgriculturalSciences,Shenyang11016LChina)Abstract：Theantagonisticbacteriaagainstgrapedownymildewwerescreenedtoprovidemoreresourcesforbiologicallycontrollingofthedisease.Withstreakplatemethod,153bacterialstrainswereisolatedfromthehealthgrapeleavesofthreevarieties.Screenedbyadualculturetechnique,5strainsexhibitingantagonisticactivitiesagainstpepperphytophthorablightwereobtained.Usingtheleafdiscforsecondaryscreening,N6wasscreenedfromthe5strains・N6hadthebetterinhibitoryeffect,withbiocontrolefficacyof74.2%.TheresultsshowedthestrainwasidentifiedasMicrobacteriumtestaceum,throughanalyzingitsmorphological,physiologicalandbiochemicalcharacteristics,16SrDNAsequenceandphylogenetics.Keywords:grapedownymildew；antagonisticbacteria；isolation；screening；identification葡萄霜霉病是一种世界性病害，病原为葡•萄生单轴霉(Plasmoparaviticala),属鞭毛菌亚门卵菌纲霜霉菌目霜霉菌科单轴霉属［1］。该病原是一种专性寄生真菌，菌丝体为无隔、多核菌丝，在寄主细胞间扩展蔓延,以瘤状吸器从寄主细胞内吸取营养。发病部位产生白色需霜状霉层，即病菌的砲子囊及砲子囊梗。葡萄霜霉病以卵砲子在病组织中或随病叶在土壤中越冬，是病害的初侵染源［2］。葡萄霜霉病日前的防治手段主耍是使用抗性品种［3,4］、改进生产管理技术和化学防治［5,6］o常年使用化学农药会导致病原菌产生抗药性、坏境污染及农药残留等问题。随着绿色农业的蓬勃发展，利用生物防治植物病害越来越受关注。如利用枯草芽抱杆菌B-FS01对葡萄霜霉病进行防治，防效达88.25%,但该菌剂还未实现工厂化生产［7］。陈娇等［8］测定了58种植物提取液对葡萄霜霉病菌的抑菌效果，结果表明,虎耳草、黄檀、马尾松、牡丹、刺槐5种植物提取液对葡萄霜霉病有抑菌效果。本研究筛选出了冇效防治葡萄霜霉病的拮抗细菌N6,并对此菌种进行鉴底，为牛防菌的储备和进一步的应用开发提供理论基础。1材料与方法1.1供试病原菌辣椒疫病菌(Phytophthoracapsici)由辽宁省农业科学院植物保护研究所提供；葡萄霜霉病菌(Plasmoparaviticala)取自衡水市葡萄采摘园。1.2培养基LB培养基、PDA培养基参照文献［9］；生理生化鉴定培养基参照文献［10］。1.3葡萄叶片采集与细菌分离选择3个葡萄品种(巨峰、红乳和夏黑)，分别在开花期、坐果期、硬核期和转色期进行釆样，每个葡萄品种设置3次重复，每次重复取4片叶,用灭菌纸袋带冋实验室对其表面细菌进行分离。在无菌条件下将叶片剪碎后放入盛有50mL无菌水的三角瓶中，加2~3滴吐温80,在150r/min的振荡器上振荡30min,菌悬液用无菌水稀释。在培养皿中加入0.1mL稀释液，然后将熔化后冷却至45°C的NA培养基倒入并混匀［11］,28°C培养3d,把形态不同的单菌落进行纯化并保存。。1.4拮抗细菌的筛选1.4.1拮抗细菌的初筛初筛采用平板对峙法，挑取辣椒疫病菌菌饼（直径5mm）置于PDA平板一侧，待测菌...