李建1，潘康成2(1．中国兽医药品监察所，北京100081;2．四川农业大学，四川雅安［摘要］细菌的生长速度和碳源有非常密切的关系，研究不同碳源对反硝化细菌生长的影响，以找到适合用于扩大培养菌种的最佳碳源。分别采用葡萄糖、酒石酸钾钠、蔗糖、乙酸和乙醇5种碳源作为唯一碳源，接种反硝化细菌进行对比实验，采用活菌数来反映不同碳源对反硝化细菌生长的影响。结果显示，葡萄糖促进反硝化细菌生长的作用明显优于其余4种碳源。对反硝化细菌进行扩大培养，葡萄糖的效果是比较好的。［关键词］反硝化细菌;碳源;生EffectontheGrowthofDenitrifyingBacteriafromDifferentCarbonSourcesLIJian1，PANKang－cheng2Abstract:Thegrowthofbacteriawasrelativetocarbonsourcesintimately．Theexperimentwasdesignedtofindthebestcarbonsourceinenlargingdenitrifyingbacteriabyresearchintoeffectonthegrowthofdenitrifyingbacteriafromdifferentcarbonsources．The5carbonsourcesincludingglucose，potassiumsodiumtartrate，canesugar，aceticacidandethanolwereusedastheonlycarbonsourcerespectivelytakingdenitrifyingbacteriaintoliquidculturemediainthecontrasttest．Livebacterianumberwasusedtoestimateeffectonthegrowthof人工反硝化细菌能有效去除硝酸盐［1］，充足的碳源对固定化细菌的反硝化作用是必要的［2］，碳源是影响脱氮的主要因素之一［3］。环境中碳源不能满足需要时，就必须投入其他碳源，以保证反硝化脱氮作用继续进行［4］。碳源一直是异养反硝化作用的研究重点［5］，甲醇、乙酸等有机物可作为反硝化过程所需的外加碳源［6－8］。为寻找高效、11．1材料与方法菌种反硝化细菌XF03株(兼性厌氧)由四川农业大学动物医学院发酵工程实验室提供。1．2仪器PYX－DHS隔水式电热恒温培养箱、奥林巴斯光学显微镜、电子天平。1．3试剂酒石酸钾钠、葡萄糖、蔗糖、乙醇、冰乙酸、KNO3、K2HPO4、MgSO4·7H2O、蒸馏水、液体石蜡、NaOH、NaCl。1．4培养基1．4．基础培养基KNO32．0g，K2HPO40．5［9MgSO4·7H2O0．41g，酒石酸钾钠20g，蒸1000mL，pH7．2，115℃灭菌备用，用于种子液培养;在液体培养基中加0．7%(W/V)琼脂粉，制成琼缸中35℃恒温培养4d后，进行活菌计数。然后取1mL种子液分别接种9mL上述5种不同的液体培养基，用灭菌的液体石蜡覆盖其表层，置于35℃培1．4．不同碳源培养基的制备制备5种不同碳源培养基。以基础培养基中的碳、氮源浓度及C/N为参比，其他物质不变，计算出其他碳源添加量(表1．6活菌计数采用平板计数法，进行活菌计数。取1mL培养液加入9mL基础液体培养基进行10倍系列稀释，选择适当稀释度的菌液滴基础培养基琼脂平皿3个，0．1mL/个，使菌液均匀散开，置于烛缸中35℃培养4d后计数菌落，计算活表15种液体培养基中碳源添加量酒石酸钾钠/葡萄糖/蔗糖/乙醇(95%)冰乙酸1．722．1数据统计对活菌计数结果进行t检验。(g·L－1(g·L－1)(g·L－结果与分析5种不同碳源对反硝化细菌生长的影响添加量C浓度N浓度204．570．27711．44．560．27710．94．590．27711．5mL/L4．56g/L0．277g/10．9mL/L4．58g/L0．277g/5种液体培养基培养的反硝化细菌活菌数如表2所示。1．5接种培养取XF03株斜面菌种接种基础液体培养基，用灭菌的液体石蜡覆盖其表层，置于烛表25种液体培养基培养的反硝化细菌XF03株活菌数CFU/培养时间菌液0d2d4d6d7．0×1064．9×1067．0×1064．9×1067．0×1061．2×1087．8×1071．1×1083．4×1073．3×1079．4×1082．3×1082．3×1085．6×1075．7×1071．5×1098．2×1072．8×1081．1×1081．2×108平均值x标准差s葡萄糖平均值x标准差s酒石酸钾钠平均值x标准差s蔗糖平均值x标准差s乙酸平均值x标准差s乙醇注:“葡萄糖”、“酒石酸钾钠”、“蔗糖”、“乙酸”、“乙醇”分别代表以上述物质作为唯一碳源的液体培养基培养的菌液。不同碳源对细菌生长的影响接种后2d，2．22．2．结果分析培养时间对细菌增殖的影响含葡萄糖的2．2．活菌数顺序为:葡萄糖＞酒石酸钾钠＞蔗糖＞乙醇＞乙酸，其比值为4．1∶3．8∶1．2∶1∶0．5。对有关菌液中，活菌数在0、2、4、6d的...