小鼠腹水型肝癌细胞系HCa—P／L6淋巴道高转移实验[murineasciteshepatocarcinomacelllinewithhighlymphaticmetastaticpotential(HCa—P／L6)]七年制08级6班Q080100191王晓露【摘要】[目的]掌握可移植性小鼠腹水癌淋巴道转移实验的操作过程；了解肿瘤动物实验模型建立的过程及意义。[方法](1)细胞系获取(2)615小鼠腋窝皮下接种肿瘤细胞(3)组织取材(4)切片染色:石蜡切片法,H.E.染色法。[结果]15只实验小鼠中0只死亡，光学显微镜下观察，在皮下瘤体和同侧腋下淋巴结中发现同样类型的肿瘤细胞（即ＨｃａＦ），远处脏器未见到转移的肿瘤细胞。[结论]可移植性小鼠腹水癌经淋巴道向其他部位发生转移。【Astract】[0bjective]Masterportabilitymiceasctiescancerlymphaticmetastasizeexperimentaloperationprocess；Understandingtumouranimalexperimentalmodeloftheprocessandsignificance.[Methods](1)celllineachieve(2)Thearmpitsubcutaneoustumorcellsinmiceinoculated(3)Organizationbased(4)Slicedyeing:Paraffinmethod,H.E.stainmethod.[Results]Thereare15laboratorymice.NodeadinthelaboratoryOpticalmicroscope,Inthesubcutaneouspseudoaneurysmwithsideaxillarylymphnodeandfoundinthesametypeofcancercells(HcaF),Thedistancevisceranotseentransferoftumorcells.[Conclusions]Portabilitymiceasctiescancerviathelymphaticwaytootherpartsoftheshift【关键词】615小鼠，肝癌，Hca-P;淋巴道转移【文献标识码】A【前言】H22肿瘤瘤株属小鼠的肝细胞瘤,系1952年苏联医学科学院肿瘤研究院(莫斯科)用O-Ptoaminoa-zotolyol(OAAT)涂C3H小鼠的皮肤100次后诱发,皮下传代的肝脏实体瘤。1963年中科院上海药物所引进后将肝脏实体型瘤株变成腹水型瘤株(其腹水型又称Hca,HAC或HepA),被广泛应用于肿瘤淋巴道转移机制研究及药物筛选。实验目的通过可移植性小鼠腹水癌淋巴道转移实验,从感性上认识肿瘤侵袭与转移的生物学特性,了解肿瘤动物实验模型建立的过程及意义。1.实验材料(1)研究对象:1)细胞系小鼠腹水型肝癌淋巴道低转移细胞株HCa-P，由大连医科大学病理学教研室建株并保存2)实验动物：近交系615小鼠，雌雄兼用，6~8周龄，体重18~22g，由大连医科大学实验动物中心提供(2)主要试剂及器皿：搪瓷盆、温度计、离心管、1ml注射器、手术刀、眼科手术剪、眼科手术镊、乳胶手套、生理盐水、1%来苏儿溶液、75%酒精棉、10%福尔马林固定液等。2.研究方法(1)细胞系获取从液氮罐中取出高转移力小鼠腹水型肝癌细胞（Hca-F）塑料冷存管，立即放入40℃的温水中，1分钟内使冻存液全部融化，立即放入无菌室中。取出细胞悬液放入离心管中，用生理盐水洗涤两次，离心，弃上清，再加1ml生理盐水吹打均匀。向小鼠腹腔内接种0.2mlHca-f细胞悬液，于第六天无菌条件取腹水。计数细胞，用生理盐水配成密度为2×107个细胞/ml的细胞悬液。(2)615小鼠皮下接种肿瘤细胞取615小鼠癌性腹水0.1ml，内含2×106个活瘤细胞，接种于615小鼠右腋中线皮下。局部严格消毒。注射针头进入皮下。定期检查右腋皮下肿瘤生长和同侧腋窝淋巴结及腹股沟淋巴结肿大情况，于接种后21天处死全部小鼠，取皮下瘤体及双侧有关淋巴结称重，同时观察肺、肝、肾等脏器。将上述组织固定于10%福尔马林固定液中，石蜡包埋制片，HE染色，显微镜检查。(3)组织取材将皮下瘤体、淋巴结、肺、肝、肾选取病变部位，切成厚约2~3mm的＜2×1cm大小的组织块，10%中性福尔马林固定。小块组织一般固定数小时，较大标本需固定24~48小时。经冲洗、透明、浸蜡，然后用石蜡将组织包埋成蜡块，再经切片机切片和染色制成切片，一般常规作HE染色。(4)切片染色:石蜡切片法,H.E.染色法1)脱水程序及时间:组织固定→冲洗→脱水→透明→浸蜡→修蜡块→切片→烘烤切片→染色2)HE切片染色程序与方法:①切片脱蜡水洗(与脱水过程相反)②HE染色③脱水,透明,封固【结果】:显微镜观察淋巴结转移的分布与转移率1．皮下瘤体：大体：皮下瘤体较大，呈灰白色，质硬，与皮下组织黏附紧密、界限不清。ＬＭ：瘤细胞分布不规律（组织结构异型性），细胞体积较大、形态不一，核较大，胞质蓝染，...