HPLC法对冬虫夏草和蛹虫草中核昔酸类成分的研讨策略3200字何帅（临清市食品药品监督管理局山东临清252600）摘要：采用反相高效液相色谱法,以SHIMADZUCIS（150mmX4.6mmI.D.,Sum）为色谱柱;以缓冲盐（KH2P04-H3P04）-甲醇（99.5：0.5）（pH3.75）体系为流动相,在流速0.8mL/min,柱温26°C,检测波长260nm,进样量20uL的条件下对上述两个样品中5—核廿酸的含最进行了分析测定。结论该法快速简便，重现性好，能有效的测定样品中核廿酸类成分。关键词：5,-核廿酸；冬虫夏草；蛹虫草菌丝体；高效液相色谱【】R914.1【文献标识码】A【】1002-3763（2014）02-0003-01核酸是生命科学中重要的复杂的生物大分子。核酸组成的分析促进了生物化学的迅速发展，因此越來越引起人们的重视。现代药理研究表明，冬虫夏草及其活性成分对免疫系统有双向调节作用，对肾脏和肝脏疾病有治疗作用，并有抗肿瘤、抗衰老和抗应激的活性［1］。蛹虫草是一种与冬虫夏草药理作用相近的药材，具有增强机体免疫力及抑制肿寤生长的作用。在含量上有些成分含量高于冬虫夏草。木文主要测定冬虫夏草、师虫草菌丝体中的5,-核廿酸。应用反相高效液相色谱系统测定上述两种样品中的核背酸类物质。1材料与方法色谱甲醇（山东禹王试剂厂）、磷酸盐缓冲液（pH二3.75,浓度0.2mol?LT）、超纯水;对照品5'-AMP（5‘-腺苛酸）、5’-CMP（5‘-胞廿酸）、5,-GMP（5‘-鸟廿酸）、5'-UMP（5‘-尿背酸）、5,-IMP（5‘-嚓吟核廿酸）、5,-XMP（5‘-黄嚓吟核昔酸）均购自中国药品生物制品检定所。分别取6种标准品，精密称定后，置于容量瓶，定容，然后稀舔成一定浓度的对照品溶液。混合标准品的配制:5'-UMP、5'-GMP、5’-AMP、5’-CMP、5’-IMP、5’-XMP浓度分别为0.0210,0.0152,0.0152,0.0160,0.0260和0・0194g・L-l。安捷伦高效液相色谱仪（Agilent1100IIPLC,America）；色谱柱：SHIMADZUC18（150mmX4.6mmI.D.,5urn）；流动相:缓冲盐（KH2P04-H3P04）-甲醇（99.5：0.5）（pH3.75）体系;流速：0.8mL/min；柱温:26°C；检测波长：260nm；进样量:20uL。样品：冬虫夏草（购白西藏白治区药材公司）；蛹虫草菌丝体（北京大学生命学院菌种室提供）。样品的制备:分别称取上述四种样品各0・500g,加lOmL水，超声粉碎，在4200r-min-1下离心20mino取上清液，用0.45Pm滤膜过滤。超声粉碎条件：JY92-II型超声波细胞粉碎机，超声5s钟，间歇5s,工作60次，重复1次，共计20min。用标准加入法对对照品中各色谱组分进行色谱分析，六种组分依次为：-CMP；5’-UMP；5'-GMP；5’-IMP；5’-XMP；5’-AMP。2方法学考察精密吸取混合标准溶液2,4,6,8和10mL,分别置于50mL量瓶中，用超纯水定容。在上述色谱条件下进样20uL,测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线,由标准曲线可知:六种对照品分别在8.2〜42.2,6.0〜31.5,5・8〜30.9,6.2〜33.0,7.1〜38.4和7.5〜41.5mg-L-l范围内具有良好的线性关系,经日内两次重复,相关系数均在0.998以上。表明此标准混合工作液，在冷藏的条件下，至少4内其浓度基本不变。称对照品一份，按上述方法制备供试液，于相同色谱条件及进样量下测定峰面积，一口内每4h测定1次，连续测定5次。将每个对照品当LI测定的5次的峰面积的平均值，及各次的峰面积积分结果进行统计,RSD分别为2.34%,2.51%,2.48%,2.08%,2.10%和2.02%(n=5)o称取对照品5份，每份0.lg,按对照品制备方法制备供试液，分别在相同色谱条件和进样量下测定峰面积，将每个对照品测定的5次的峰面积的平均值，及各次的峰血积积分结果进行统计,RSD分别为2.09%,2.23%,2.10%,2.52%,2.05%和2.11%(n二5)。结果表明样品供试品溶液在8h内基木稳定。2.1冬虫夏草取约0.25g己知含量的样品，精密称定。精密加入已知量的对照品适量，按样品条件进样测定。取已经处理好的样品于高效液相色谱仪配备的样品瓶中，按最佳色谱条件进样。用标准加入法对各核昔酸类组分进行定性，然后用标准曲线法计算样品中所含各种核廿酸的含量分别为：5'-UMP886.Oug・g-1、5’-GMP11.lug・g-l、5’-IMP1640.4Pg•g-l>5"-AMP153.7ug•g-lo2.2师虫草菌丝体取约0.25g已知含量的样品，精密称定。精密加入已知量的...