.论著*地高辛标记DNA探针杂交法检测Vero细胞DNA残留量的适用性验证及应用孙小慈，刘晓凡,赵雅静，马超，刘鹏，冯德杰，李薇，魏然，王革兰州生物制品研究所有限责任公司质量检定室甘肃省疫苗工程技术研究中心，甘肃兰州730046摘要：目的对地高辛标记DNA探针杂交法检测人用狂犬病疫苗（Vero细胞）DNA残留量进行适用性验证及应用。方法对地高辛标记DNA探针杂交法检测人用狂犬病疫苗（Vero细胞）DNA残留最进行特异性、灵敏度及稳定性验证，并应用该方法检测3批人用狂犬病疫苗（Vero细胞）的DNA残留量。结果地高辛标记探针的标记效率为0.1pgo验证结果显示探针与非同源DNA无杂交;最低检测限度为1pg;探针在-20Y放置7个月后，检测灵敏度仍可达到1pg;3批人用狂犬病疫苗（Vero细胞）中残留DNA含量均符合《中国药典》规定质址控制标准。结论地高辛标记DNA探针杂交法特异性、灵敏度好.结果稳定，适用于人用狂犬病疫苗（Vero细胞）中Vero细胞DNA残留量的检测及疫苗生产过程和其成品的质量控制，对其他以Vero细胞为基质的病毒性疫苗质最控制具有借鉴意义。关键词:地高辛;DNA探针;斑点杂交;Veru细胞;DNA残留场中图分类号：Q952.6文献标志码：A文章编号：1005-5673（2016）02-0040-05DOI：10.13309/j.cnki.pmi.2016.02.007ApplicabilityvalidationandapplicationofDigoxigenin-labeledDNAprobeindetectionofresidualDNAbyhybridizationinVerocellSUNXiao-hui.LIVXiao-fan,ZHAOYa-jing,MAChao,LIUPeng,FENGDe-jie,LIWei,WEIRan,WANGGeDepartmentofQualityControl,iMnzhouInstituteofBiologicalProducesCo.，/以.,CenterforGansuProvincialVaccineEngineeringResearch,Lanzhou730046,GansuProvince,ChinaCorrespondingauthor：WEIRan,E-mail:rwei@vacmic.comAbstract:ObjectiveObjectiveTodetecttheresidualDNAquantityinVerocellcontainedinrabiesvaccine（Verocell）forhumanuse（simplifiedasrabiesvaccine）byDigoxigenin-labeledDNAprobe,andtheapplicabilityofthemethodwasverifiedandapplied.MethodsTheDigoxigenin-labeledDNAprobewascarriedoutinverificationofthespecificity（Sensi-tivity.repeatabilityandstabilityfordetectingtheresidualDNAquantityinVerocellcontainedinrabiesvaccine,andthemethodwasappliedtodetectresidualDNAquantityinVerocellof3batchesofrabiesvaccine.ResultsThelabelingeffi-ciencycouldreach0.1pg.Theverificationresultshowedthattherewasnohybridazationbetweenthelabeledprol）eandheterologousDNA,andtheminimaldetectivelimitreached1.0pgandthedetectivesensitivitywaskeptin1.0pgafterthelabeledprobestoredat-20X.for7months.Hieresultsconformedtothequalitycontrolstandardspublishedin《Phannar-copoeiaofthePeople'sRepublicofChina）indetectingresidualDNAquantityinVerocellin3batchesofrabiesvaccine.ConclusionThedothybridizationmethodisspecific,sensitive,stableandwellrepeatable,itisusedindetectingresidualDNAquantityinVerocellcontainedinrabiesvaccine.Asaresult,themethodissuitableinproductionandquantitycontrolofrabiesvaccine,ithasahelpfuleffectinpreparationoftheotherviralvaccinesbyusingVerocellasasubstrate.Keywords:Digoxigenin;DNAprobe;Dothybridization;Verocell;ResidualDNAquantityVero细胞是世界卫生组织（WorldHealthOr-作者简介:孙小慧（I962-）,女，医学生物学高级工程师，主要从事病毒性疫苗研发及检测工作。通讯作者:魏然，医学生物学高级工程师.E-mail：rwei@vacmic.comganization,WHO）推荐使用制备人用疫苗的培养基质,该传代细胞系，生长快、易培养，并在规模化病毒培养（生物反应器）中显现出极大的优势，解决了病毒性疫苗规模化生产的瓶颈。Ver。细胞DNA具有潜在的致瘤性,因此，以Vero细胞为基质的疫苗对宿主细胞残留DNA含址需要进行严格的质量控制，并且也是评价疫苗安全性及质量的关键因素之一。在《中华人民共和国药典》三部（2010版）（以下简称为《中国药典》）中规定，外源性DNA残留量...