HPV联合TCT检查对不同级别宫颈病变HPV感染状态患者的筛查意义研究魏晓芳江苏省连云港市妇幼保健院江苏连云港222005【摘要】目的探讨HPV联合TCT检查对不同级别宫颈病变HPV感染状态患者的筛查意义•方法选择我科收治的72例CINII-III级患者，在治疗前进行HPV感染率、基因亚型检测，以及TCT细胞学检测•结果不同级别宫颈病变患者的HPV阳性率、TCT异常率比较，差异无统计学意义(P>0・05).所有患者屮共计HPV阳性者67例，检出HPV亚型12种，所占比例最高者为16型(53.73%),其次为58型(20.90%)、33型(13・43%),其屮67例HPV(+)者中TCT正常者12例,TCT异常者55例；5例HPV(—)者中TCT正常者2例，TCT异常者3例.两者比较未见明显差异(P>0・05).HPV与TCT检测均为阳性者的敏感性为76・38%〃高于其他检测结果的敏感性•结论在对于不同级别宫颈病变HPV感染状态患者的筛查屮，应将年龄扩展至30岁以卜;HPV多重感染可能是导致疾病进展的主要因素，故而HPV联合TCT检测可起到较好的筛查作用.【关键词】宫颈病变;HPV感染;基因分型;TCT检测;筛查【屮图分类号】R737・3【文献标识码】B【文章编号】1008—6315(2015)12—0068—02宫颈病变属于妇科常见疾患，据相关统计学数据分析，全世界每年约有49万新发病例，尤以宫颈癌居多，其中发展屮国家的发病率已超过所有病例的80%[1],且就我国而言，近年来宫颈癌的发病率不仅呈高发趋势，且发病年龄渐趋年轻化[2],故而世界卫生组织(WHO)指出，至2020年子宫颈癌每年新发病例可能达到70万，而约90%会发生在发展中国家[1]，可见，对于发展屮国家而言如何对于宫颈病变尤其是宫颈癌进行预防与诊断是需要解决的问题.白上世界70年代在宫颈癌的性传播疾病模型屮高危型人乳头瘤病毒(HPV)的作用被提出后，越来越多的证据表明，感染HPV是导致宫颈癌发病，尤其是浸润性癌的核心因素[3]，而对于宫颈病变的诊断，临床多采取细胞学、阴道镜以及组织病理学检查的三阶段诊断方法，但是由于后两者属于有创性检查，故而临床多不作为首选检测，而细胞学检查既往多应用巴氏法，但其假阴性率较高，而TCT作为一种液基细胞学检测产品，以其背景清晰，观察简单，漏诊率低的特点而渐趋应用于宫颈病变的筛查和预后病情评估[4],但两者结合对于不同级别宫颈病变HPV感染状态患者的筛查有何意义，未见相关报道，因此，本研究对此进行探讨，以期对于临床有所裨益.1资料与方法1・1研究对象将2014年1月~2014年12月在我院就诊J1经病理组织学确诊的72例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者,根据宫颈上皮细胞不典型增生程度确定为IITII级并切缘为阴性的病历资料完整的患者作为研究对象，纳入本项目之中.1・2-般资料所有患者年龄24-76岁，平均(41.9±3.6)岁;孕次沬孕者3例启育者69例，其中孕育1个者34例,2个者22例,3个及以上者13例;民族:汉族者48例，少数民族者24例;分级情况:II级者7例级者22例』I级者43例.1.3研究方法1.3.1HPVDNA检测标本均由我科医师经阴窥器暴露宫颈采集，采集前3d告知患者阴道内禁用药物及冲洗，前1d禁止性生活，将采集后的标本放入保存液小瓶，而后去0・5ml液体,离心弃上清液，采用人乳头瘤病毒基因分型检测试剂盒(PCR—反向点杂交法)(中山大学达安基因股份有限公司)对13种常见高危型HPV进行定量检测，将样本DNA分解为核昔酸单链，与RNA探针结合形成RNA-DNA杂交体，并被标记有特异性单克隆抗体的微孔板捕获，加入结合有碱性磷酸酶的多个二抗与RNA-DNA杂交体结合,使信号放大，将底物进行化学发光比色后通过检测标本的相对光单位值(RLUs)和阳性对照值(CO),用RIUs/CO值表不待测的HPVDNA的含量;采用凯普生物化学科技公司HPV核酸扩增分型检测试剂盒同时对21种HPV亚型进行分型检测，首先利用QIAMini试剂盒(购自德国QIAGEN公司)进行DNA提取,而后依次进行DNA扩增、导流杂交以及滴入NBT/BCIP底物芯片进行显色,1h内依据“TBS报告内容及标准”进行是否存在癌细胞核上皮内病变细胞、鳞状上皮细胞、腺细胞异常以及提示病原体感染的结果判读[3].1.3.2TCT检测采集宫颈鳞柱上皮交界部位及宫颈管内脱落细胞，采集过程中需采用新柏氏公司TCT技术专用毛刷进行取材，同吋使用TCT专用制片机制成薄层涂片,经巴氏染色后...