紫外检测-反相高效液相色谱法测定唾液富组蛋白5的实验研究李岩1,2曾红燕1邹晓莉1李庆福3周红梅3（1．四川大学华西公共卫生学院卫生检验教研室，四川成都610041；2.四川安全生产检测检验技术研究院职业危害检测所，四川成都610000；3.四川大学华西口腔医院黏膜科，四川成都610041）[摘要]目的建立测定唾液中富组蛋白5的反相高效液相色谱法。方法将收集的唾液样品用pH2.5的磷酸盐缓冲液适度稀释后，离心，取上清液进样，于0.01mol.L-1磷酸盐缓冲液(pH3.5)中洗脱，经反相C18柱分离，紫外检测器在276nm波长处测定其中的富组蛋白5含量。结果方法的线性范围为1.0~50.0µg.mL-1，检出限为0.12µg.mL-1，标准溶液测定保留时间和峰面积的相对标准偏差分别为0.68%和4.13%。将所建立的方法用于唾液样品的分析，获得了较为满意的结果，样品测定的相对标准偏差为4.41%，加标回收率为88.4%~109.0%。结论方法准确快速，样品处理简单，15min内可完成一次分析周期，适用于唾液中富组蛋白5的快速检测。[关键词]富组蛋白5；唾液；高效液相色谱法[中图分类号]R781.7[文献标志码]A[doi]10.3969/j.issn.1000-1182.2010.06.0[收稿日期]2009-09-05；[修回日期]2009-10-21[基金项目]教育部新世纪优秀人才支持计划基金资助项目（NCET07-0591）[作者简介]李岩（1980—），男，新疆人，检验师，理学学士[通讯作者]邹晓莉，Tel：15882145005Determinationofhistatins5insalivarybyreversed-phasehighperformanceliquidchromatographymethodwithultravioletdetectionLIYan1,2，ZENGHong-yan1，ZOUXiao-li1，LIQing-fu3，ZHOUHong-mei3.（1.Dept.ofSanitaryTechnology，WestChinaSchoolofPublicHealthofSichuanUniversity,Chengdu610041,China;2.“ExaminationInstituteofOccupationalHazards,SichuanAcademyofInspectingandTestingTechnologyforSafetyProduction,Chengdu610000,China；3.Dept.ofOralMedicine,WestChinaCollegeofStomatology,SichuanUniversity，Chengdu610041,China）[Abstract]ObjectiveThedeterminationmethodofhistatins5inhumansalivawithreversed-phasehighperformanceliquidchromatography（HPLC）wasdeveloped.MethodsSalivarysampleswerecollectedanddilutedwithphosphatebuffer(pH2.5).TheuppersolutionwasdeterminedwithHPLC.Phosphatebuffer(pH3.5)ofthemobilephaseandC18columnwasusedthroughouttheexperiment.Thedetectionwavelengthwas276nm.ReasultThelinearrangeswere1.0~50.0µg.mL-1.Thedetectionlimitwas0.12µg.mL-1.Therelativestandardderivations(RSDs)ofstandardsolutionforreservedtimeandpeakareawere0.68%and4.13%respectively.Theproposedmethodwasappliedforanalysisofsalivarysamplesandthesatisfactoryresultswereobtained.RSDforsampledeterminationwas4.41%andtheaveragerecoverieswere88.4%~109.0%.ConclusionThemethodwasquick，simpleandaccurate.Analyticaltimewaslessthan15min.Itwasadaptedforanalysisofsalivaryhistatins5insalivarysamples.[Keywords]Histatins5；salivary；reversed-phasehighperformanceliquidchromatography富组蛋白是一族富含组氨酸的阳离子同源多肽，主要存在于人类和灵长类的唾液腺、颌下腺和舌下腺分泌物中。迄今为止，人类已经从唾液腺和颌下腺唾液中分离出至少12种富组蛋白，其主要成分为富组蛋白1、富组蛋白3和富组蛋白5，占富组蛋白总量的85%~90%。富组蛋白虽占唾液蛋白总量的0.1%~0.2%，但该蛋白质在宿主非免疫防御系统中扮演着重要的角色，可参与牙获得性膜的形成，调节牙菌斑的pH，具有抗徽生物作用，对维护口腔正常生理功能和口腔微生态的动态平衡起着重要作用。研究该蛋白质对探索龋病、牙周病和白色假丝酵母菌病等的病因和预防有一定的意义[1-2]。目前，关于富组蛋白的分离分析有诸多的报道，但大多研究都着重于定性检测和分离纯化[3-4]，定量测定的方法鲜有报道。本文应用高效液相色谱法，建立了一种定量测定唾液样品中富组蛋白5的方法，样品处理简单，分析周期短，适合批量唾液样品的分析。1材料和方法1.1仪器与试...