万方数据１．５木醋杆菌Ｃ５的镜检观察对发酵液表面的纤维素膜及酶解制得的菌悬液，进行石炭酸复红染色，荧光显微镜观察菌体形态。１．６木醋杆菌ｃ５菌悬液的紫外诱变处理将１５ｍＬ菌悬液转入培养皿（直径９ｃｍ）中，置于磁力搅拌器上。紫外灯（２５４ｎｍ，２０Ｗ）位于培养皿上方２０ｃｍ处，设定照射时间为１、２、３、４、５ｍｉｎ进行诱变。诱变处理后的样品用生理盐水（ｏ．８５％ＮａＣｌ）进行梯度稀释（１。１０）。取ｌｏｏ弘Ｌ稀释液，平铺在诱变固体培养基上，３０℃避光培养８ｄ，计算菌落数。由菌落数绘制木醋杆菌Ｃ５的致死率曲线。１．７高产纤维素诱变菌株的筛选挑起诱变平板上的残活菌落，将这些茵落转到含有７．５ｍＬ诱变液体培养基的试管中。３０℃下静态培养８ｄ，以野生型木醋杆菌Ｃ５作对照，试管中纤维素合成的厚度可以通过视觉判断，筛选出产量比木醋杆菌Ｃ５大的菌株。初筛出的高产诱变菌株和木醋杆菌Ｃ５分别转入４０ｍＬ诱变液体培养基中，接种量５％，３０℃培养８ｄ，测定纤维素的产量。比较木醋杆菌Ｃ５和诱变菌株的产量，选出高产的细菌纤维素诱变菌株。１．８诱变菌株的传代实验将诱变菌株连续传代５次，测定５次的纤维素产量，确定诱变菌株产量是否稳定。２结果与讨论２．１木醋杆菌Ｃ５茵悬液的镜检观察木醋杆菌Ｃ５在纤维素膜上和菌悬液中的状态如图１和图２所示，可见菌体呈杆状，笔直或微弯曲，单个排列。菌悬液中菌体分布均匀、状态良好。图１从ｌｏｏ倍油镜观察到纤维紊膜上Ａ趔丘ｎⅫｌｃ５的状态２．２木醋杆菌Ｃ５菌悬液的紫外诱变处理木醋杆菌的致死率监线如图３所示，木醋杆菌的致死率随照射时间的延长而增大。在诱变时间为３ｌＴｌｉｎ时，致死率为９９．３％。一般而言，紫外照射的致死万方数据图２从１００倍油镜观察到Ａ－掣ＺｉＭｍＣ５在菌悬液中的均匀分布率在７５％～８５％时，高产菌株诱变效果较好。但对于未经过诱变处理的野生菌，则可采用较高的剂量处理，效果较好。结合有关资料综合考虑，以提高菌种的突变率为目的，选择紫外照射３ｍｉｎ作为诱变剂量。∞∞∞、啦静∞馘旃∞∞ｏ照射时间，ｒｌｌｉｎ图３木醋杆菌Ｃ５的致死翠曲线２．３高产纤维素诱变菌株的筛选挑起２３０个诱变菌落进行初筛，筛选到７２株产膜厚度高于木醋杆菌Ｃ５的突变菌，正向突变率为３１．７％。复筛得到２４、４４、６８、９８四株菌的产量显著高于其它菌株。将这４株菌转入发酵培养基中，产量对比如表３。其“中４４号菌产量增幅最大，命名为木醋杆菌突变株Ｃ５４４（Ａ．ｚｙＺｉ，ｌ优Ｃ５４４）。Ａ．ｚｙ尻一“７ｌｍＣ５４４在发酵培养基中的纤维素产量为３．５２９／Ｌ，是木醋杆菌Ｃ５产量的１．５倍。表３突变菌株细菌纤维素产量ｇ／Ｌ编号１２３平均值２．４传代实验结果木醋杆菌突变株Ｃ５４４菌株传代结果如表４所示。对比５代的纤维素产量可知此菌产纤维素性能稳定。至ＱＱ！笙蔓塑鲞蔓！塑（璺蔓至箜塑）｜２７表４传代实验的细菌纤维素产量ｇ／Ｌ参考文献胡晓燕，曲音波．细菌纤维素的研究进展［Ｊ］．纤维素科学与技术，１９９８，６（４）：５６～６４２０ｋｉｙａｍａＡ，ＭｏｔｏｋｉＭ，ＹａｍａｎａｋａＳ．ＢａｃｔｅｒｉａｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅＩＩ，Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇｏｆｔｈｅｇｅｌａｔｉｎｏｕｓｃｅｌｌｕｌｏｓｅｆｏｒｆｏｏｄｍａｔｅ血ｌｓ［Ｊ］．ＦｏｏｄＨｙｄｒｏｃｏｌｌｏｉｄｓ，１９９２，６：４７９～４８７３结论ＷｕｌｆＰＤｅ，ＪｏｒｉｓＫ，ＶａｎｄａｍｍｅＥ．ａｎＩｍｐｒｏｖｅｄｃｅｌｌｕｌｏｓｅｌｉｍｉｔｅｄｉｎ（１）对木醋杆菌Ｃ５进行紫外诱变处理是获得高产突变株的有效方法。实验确定紫外照射３ｍｉｎ作为诱变剂量，正向突变率为３１．７％。（２）筛选得到高产木醋杆菌突变株Ｃ５４４，产量是木醋杆菌Ｃ５的１．５倍。木醋杆菌突变株Ｃ５４４连续传代５次，纤维素产量稳定。４ｆｏｒｍａｔｉｏｎｂｙＡｃｅｔｏｂａｃｔｅｒｘｙｌｉｎｕｍｍｕｔａｎｔ（ｋｅｔｏ）ｇｌｕｃｏｎａｔｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓ［Ｊ］，ＪＣｈｅｍＴｅｃｈＢｉｏｔｈｃｈｎｏｌ。１９９６，６...