PD-1PD-L1在多发性骨髓瘤中的表达及临床意义翁珊珊郑翠苹(通讯作者)吴圣豪胡型忠范玉芳温州市中心医院(温州医科大学定理临床学院)血液化疗科浙江温州325000本课题受浙江省公益性技术应用研究项目(编号:2014C33159)资助本课题无经济利益冲突【摘要】目的探讨PD-1/PD-L1在多发性骨髓瘤中的表达及临床意义•方法采用流式细胞术检测初治MM治疗前后及健康体检者外周血T细胞表面PD-1的表达，并对其与MM的临床分期及临床疗效进行相关性分析.结果①初治外周血T细胞上PD—1的表达较健康体检者高，且治疗后明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);©PD—1的表达水平与疾病分期呈正相关，与临床疗效呈负相关，差异有统计学意义(P<0.05)•结论PD-1/PDL1信号途径可能参与了的免疫逃逸及恶性增殖，有望成为MM免疫治疗的新靶点及预后指标.【关键词】多发性骨髓瘤；PD-1;免疫治疗【】R733.3【文献标识码】A【】1008—6315(2015)10—0052—02多发性骨髓瘤(multiplemyeloma,MM)^造血系统恶性克隆性疾病，其发病率居血液系统恶性肿瘤第二位，传统化疗方法完全缓解率不高，中位牛存期只有2—2.5年[1].其原因之一可能为骨髓瘤细胞通过某种机制逃避机体的免疫监视和杀伤•导致MM免疫功能紊乱的一个因素是程序性死「一1(proGcesseddeath—1,PD—1)的蛋白质・PD—1是B7家族的一个具有抑制作用的共刺激分子注要表达于活化的T淋巴细胞、B淋巴细胞和巨噬细胞表面，在T(细胞的激活和耐受中起了关键作用[2].其配体为程序性死广分-了1配体一1Programmeddeath1-ligand,PD-L1)[3].二者结合后，由PD-1传递负性调控信号诱导肿瘤抗原特异性T细胞的凋亡和免疫无能,促使肿瘤的免疫逃逸[4-6].由此可推测，可通过细胞免疫水平的干预为抗骨髓瘤免疫治疗方案的实施提供基础,但是逆转骨髓瘤相关的免疫仍然面临严峻的挑战[7].本研究报道了PD-1在初治多发性骨髓瘤中的表达,并探讨其临床意义.1资料与方法1.1资料选取2013年10月至2015年3月我院收治的30例初发MM患者，年龄38-78岁，中位年龄65岁；I期3例，II期16例』I期11例[依据国际临床分期系统(ISS)],其诊断标准及疗效评价统一参照?中国多发性骨髓瘤诊治指南?及国外诊断及疗效评价标准•所有患者要接受的治疗方案为含硼替佐米的BCD方案((硼替佐米1・0—1.3mg/m2d1,d48,d11;环磷酰胺0・3g/m2，每疗程的d1>d11静脉注射;地塞米松20mg/d,每疗程的第1—2天、第4—5天、第8-9天及第11—12天静脉滴注，每28d为1个疗程，根据患者年龄、一般状况、重要脏器功能等,适当调整药物剂量)化疗4个疗程.患者年龄、性别等一般情况具有可比性，差异无统计学意义(P>0・05).所有入选患者在研究前7d未接受任何治疗.健康志愿者来自我院体检人员15例，均无肿瘤、外伤、感染、传染病及自身免疫性疾病史，其中男性9例，女性6例，年龄40-65岁，中位年龄50岁.木研究获得医院伦理委员会批准，所有入选患者均签署知情同意书和治疗同意书・1・2主要仪器及试齐(JCD8—PECY7、CD4PECY5、CD45RAFITC>CD27APC>PD-1-PE及相匹配的对照抗体>PBS(HyClone)分离洗涤液均购自BD公司;溶血剂(溶血素：蒸镭水=1:9实验室自制);流式细胞仪FACSCalibur购自美国BD公司.釆用flowjo流式分析软件对结果进行数据分析.1・3方法1・31PD-1的测定抽取初治MM患者及健康体检者外周静脉血，肝素抗凝，用溶血素对标木进行溶血分离淋巴细胞,PBS洗1次，加入CD4/CD8、CD45RA、CD27和PD-1表面分子抗体，室温避光染色20min,离心弃上清，细胞用PBS洗涤2次,悬浮于500mu;IPBS中,室温避光保存.用流式细胞仪分析，获取细胞数不少于50000个，并用flowjo流式分析软件对结果进行分析・1・32治疗后PD-1的测定在患者接受化疗4个周期后,抽取患者外周血，肝素抗凝备用.操作方法及流程同上・1・33临床疗效评价30例MM患者均在治疗4个周期后进行疗效评价,将疗效分为完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、疾病稳定(SD)、疾病进展(PD).1・34统计学分析使用SPSS17.0统计软件进行分析，对正态分布的数值变量以均数plusmn;标准差(xplusmn;SD)表示;两样本均数的比较采用t检验和Spearman相关性分析;以PV0・05为差异有统计学意义.2结果2.1用流式细胞术对健康体检者PD—1的表达进行检测，...