2个非血缘关系家系的3例CPHD的PROP1基因缺失研究张晓妍关键词：垂体激素缺乏症;PROP1;生长激素;促甲状腺激素;催乳素：R730：BDOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.07.063：1006-1959（2019）07-0191-02垂体激素缺乏症（combinedpituitaryhormonedeficiency，CPHD）在临床主要是由于外伤、严重缺氧、手术期间损伤以及慢性疾病所造成的垂体活性抑制性疾病[1]。从生物学角度分析[2]，人体的垂体组织是由口腔顶部外胚层发育而来，一般在患者的胚胎发育第9天，形成垂体基板，同时随着口腔外胚层的内陷，逐步形成垂体囊原基，同时，在胚胎发育第12天，囊原基闭合从口腔外胚层进行分离，通过各种转录因子和信号通道在患者的垂体背部形成梯度分布，最终分化为多个细胞体系[3]。在近年来的研究中发现[4]，垂体特异性转录因子祖先蛋白（ProphetofPit-1，PROP1）缺陷是该疾病在人群中最为常见的病因之一，且在家族遗传性垂体激素缺乏症患者的检出率最高。PROP1基因在胚胎发育的不同时期通过对细胞出现的时间和空间进行调控，最终促使其分化为垂体激素分泌细胞[5]。而人类的PROP1基因主要是由3个外显子以及2个内显子组成，由上述外显子和内显子共同组成人体的垂体分泌细胞结构域，当人提的该结构域发生突变或者缺陷时，则会导致机体生长激素（GH）、促甲状腺激素（TSH）以及催乳素（PRL）的分泌异常或缺乏，以上生长发育的重要激素的缺乏在不同的生长发育阶段表现为严重的年龄差异，80%的患者可表现为生长发育迟缓[6]，青春期肾上腺皮质功能表现为进行性加重。本研究将通过2个非血缘关系家系的3例CPHD的PROP1基因缺失研究，为临床提供科学依据。1临床资料研究对象为3例肾上腺激素缺乏患者，女性患者2例，男性患者1例，其中2例女性患者的就诊年龄分别为15岁、16岁，男性患者就诊年龄为22岁。为研究方便，将以上患者按照年龄大小依次编号为A、B、C，其中，A、B患者为单卵双生，于3岁发现身材矮小，生长速度缓慢，其生长速度平均为1～2cm/年，剖腹产生产，生产过程中未见宫内窘迫以及严重缺氧，父母存在近亲结婚史，父母身高及智力正常，A、B2例患者经血液检查，均存在血清甲状腺激素、促甲状腺激素、性激素以及促肾上腺皮质激素分泌降低等现象，经骨龄测定，2例患者的骨龄均为3.5岁，C患者为男性，于7岁发现生长发育迟缓，生长发育迟缓，年平均生长速度为2～3cm，患者足月生产，生产过程中均无窒息、窘迫等疾病史，父母近亲结婚，性功能发育迟缓，男性体征不明显，患者经血液检查，患者的甲状腺功能异常，生长激素正常，性激素分泌降低，且患者的骨龄测定显示，患者的骨龄测定为10岁。3例患者经生长激素治疗后，身高均升高2～3cm，提示垂体激素、生长激素分泌异常。空腹抽取3例患者的血液5ml，加入抗凝剂后，对患者样品进行细胞裂解液处理，混匀，离心（3600r/min，15min），取下层液体加入缓冲液混匀，56℃水浴10min，混匀，使用500ml异丙醇混匀，再次离心，弃去上清液，加入500ml乙醇溶液混匀后继续离心，弃去上清液，干燥提取DNA，加入200μl缓冲溶液TB，65℃加热1h，充分溶解DNA备检。使用实时荧光定量PCR仪器，使用引物为5'-ACCTACACACACATTGAGAGACAG-'3进行DNA扩增[7]，同时，通过使用geneloc对患者的基因进行PROP1基因探查。使用琼脂糖凝胶进行电泳实验，以正常人体的靶基因作为对照，正常人体的提取DNA进行引物为5'-ACCTACACACACATTGAGAGACAG-'3，对正常人以及患者的PROP1基因的侧翼进行扩增分析，扩增方法分别从5'以及3'的上游和下游进行，扩增结束以患者的相邻序列出现“-”到“+”转变为止。在正常人体中均发现GDB：314805STS、F4、F5、F1、F2、F3、RH102778STS、HR1、HR2、SQ1、SQ2、SQ3、SQ4、SQ5、SQ6、SQ7、HUMC5597STS、Q6ZTH3EXON1、SHGC-147122STS等基因片段，而在本研究患者中仅出现F5基因片段，而在SHGC-147122STS和Q6ZTH3EXON1基因片段中，PROP1基因外显子1出现明显扩增，患者出现基因缺失片段就在该位置，进而对SHGC-147122STS和Q6ZTH3EXON1之間的基因片段进行再次扩增，发现正常人体和3例患者的SQ2、SQ3、SQ5、SQ6、SQ7基因片段大小一致。患者的SQ1、SQ4基因片段与正常人...