中平树中东蒐若内酯的分离鉴定及含量测定摘要：采用硅胶柱色谱分离纯化的方法从屮平树［Macarangadenticulata(Bl.)Muel1・Arg.］中分离得到一种香豆素类化合物，根据理化性质及光谱数据鉴定其为东罠若内酯。并采用ZORBAXEclipseXDB-C18色谱柱(250mmX4.6mm,5um),以甲醇：0.1%冰醋酸(39:61)为流动相，流速1.0mL/min,检测波长345nm的色谱条件，用HPLC法测左屮平树屮东萇若内酯的含量。结果表明，东萇若内酯在1.45-7.24Pg/mL范围内与其峰面积呈良好的线性关系，平均回收率为99.18%,RSD为1.18%(n=6)o该方法简便、准确、快速，可用于中平树药材的质量控制。关键词：屮平树［Macarangadenticulata(Bl.)Muell・Arg.］；东萇若内酯；分离纯化；高效液相色谱法中图分类号：R284.1文献标识码：A文章编号：0439-8114(2016)18-4805-03D0I：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.18.044屮平树［Macarangadenticulata(Bl.)Muell・Arg.］为大戟科血桐属植物，乂名血桐、糠皮树、赖麻、牢麻等，分布于广东、广西、贵州、云南、西藏等地。其根味苦，性凉。具有清热利湿、退黄的功能，主治黄疸型肝炎，胃皖疼痛［1］。广西民间主要用其根部治疗黄疸性肝炎方面的疾病［2］,应用前景广阔。为探明中平树根的化学物质基础，本试验从中平树药材中分离鉴定得到了东萇君内酯，并采用高效液相色谱法对其含量进行了测定，该方法可用于中平树药材的质量控制。1材料与方法1.1材料与试剂中平树采自广西马上县，山广西中医药研究院何开家主任中药师鉴定为中平树。东萇君内酯对照品为从中平树中提取分离获得，经结构鉴定并采用HPLC归一化法测得含量大于98%后使用；甲醇为色谱纯；水为去离子水；其余试剂为分析纯。1.2仪器IR-470型红外光谱仪、LC-10AT型高效液相色谱仪、威玛龙色谱工作站、AUW220D型分析天平、AEL-200型分析天平（口本岛津公司）,DRX-500MlIz型超导核磁共振仪（瑞士布鲁克公司），ZDM-83-1型电热熔点仪（江苏科教玻璃仪器厂），KQ-500DB型数控超声波清洗器（昆明市超声仪器冇限公司），HH-S2型数显恒温水浴锅（金坛市医疗仪器厂），SHB-ITI型循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）。1.3方法1.3.1提取分离中平树粉碎成粗粉，称取12kg,加8倍体积95%乙醇浸泡过夜后加热回流提取4次，每次2h,合并提取液，减压回收乙醇,得浸膏。浸膏加入海沙使其分散均匀，依次用石油瞇（60〜90°C）、乙酸乙酯回流提取，回收溶剂后分别得到右油醴部位及乙酸乙酯部位。取乙酸乙酯部位进行硅胶柱色谱分离，用石油瞇（60-90°C）—乙酸乙酯混合溶剂（100:0-70:30）梯度洗脱，共收集265个流分。采用薄层鉴别将各流份分别合并，将第150流份到第183流份合并，反复柱层析及重结晶得到黄色针状结晶。1.3.2对照品溶液的制备精密称取东萇若内酯对照品3.62mg置于250mL量瓶，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，得浓度为14.48ug/mL的对照品储备液，备用。精密量取14.48ug/mL的对照品储备液3.0mL置于10讥量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得浓度为4.34ug/mL的对•照品溶液。1.3.3供试品溶液的制备精密称定中平树药材粉末(过40目筛)2.0g,置烧瓶中，精密加入70%乙醇50mL,称定重量，加热回流lh,放冷,再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25mL,置烧瓶中，浓缩至约1mL,加3mol/L盐酸溶液10mL,水浴中加热水解1h,立即冷却，移入分液漏斗中，用水10mL洗涤容器，并入分液漏斗屮，用氯仿强力振摇5次，每次15mL,合并氯仿液，立即加甲醇使溶解，转移至10汕量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。1.3.4色谱条件釆用ZORBAXEclipseXDB-C18色谱柱(250minX4.6mm,5um),流动相为甲醇:0.1%冰醋酸水溶液(39:61),流速1.0mL/min,柱温为室温，检测波长345nmo分别精密吸取东萇着内酯対照品、供试品和空白溶液各10PL,进样分析，记录色谱图(图1、图2)。理论塔板数按东萇若内酯计算应不低于3000,东萇君内酯峰与相邻峰的分离度大于1.5,供试品中其他成分不干扰测定。2结果与分析2.1东萇着内酯的结构鉴定黄色针状结晶(氯仿),m.p.:202-204°C,EI-MSm/z：192[M+]。1HNMR(500MHz,MeOD)87.85(1H,d,J=9.4Hz,H-4),7.11(1H,s,H-8),6.77(1H,s,H-5)...