三七皂昔PNS-5溶血性及生物免疫活性探［摘要］目的：研究三七皂昔PNS-5的溶血性及生物免疫活性。方法：常规方法提取PNS,大孔树脂柱层析分离纯化得PNS-5。溶血试验测定红细胞溶血率，脾淋巴细胞增殖反应测定PNS-5的生物免疫活性。结果：PNS-5溶血性较小,其HD50大于8mg/mlPNS-5(0.1pg/ml)显著促进了ConA和LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖反应。结论：PNS-5安全性好，能促进细胞和体液免疫。［关键词］三七皂昔PNS-5;溶血性；生物免疫活性；脾淋巴细胞增殖反应［中图分类号］R392［文献标识码］A［文章编号］1673-7210(2008)10(b)-010-02StudyonhemolyticcharacteristicsandimmunocompetenceofbiologyofPNS-5QINFeng,CHENYu-yong,MAOMei-li,CHENYing-ying(JiangsuAnimalHusbandry&VeterinaryCollege,Taizhou225300,China)［Abstract］Objective:Tostudythehemolyticcharacteristicsandbiologicimmunocompeteneeoftotalsaponinsofpanaxnotognseng-5(PNS・5).Methods:PNSwasextractedwithgeneralmethodofnormalbutylalcohol.PNS-5wasobtainedbyseparatingandpurifyingPNSwithD101macroreticularresin.ThehematolysisrateandbiologicimmunocompetenceofPNS-5weredetectedwithhemolysistestandexperimentofsplenocyteproliferationrespectively.Results:TheHD50ofPNS-5wasbiggerthan8mg/mlanditsignificantlyincreasedconcanavalinA(ConA)andlipopolysaccharide(LPS)-stimulatedsplenocyteproliferationinvitroinaconcentrationof0.1pg/ml.Conclusion:PNS-5hashighsecurityandisabletoincreasecellularandhumoralresponse.[Keywords]Totalsaponinsofpanaxnotognseng・5(PNS・5);Hemolyticcharacteristics;Biologicimmunocompetenee;Splenocyteproliferation三七总皂昔(PNS)是五加科人参属植物三七的主要有效活性成分，含有多种单体皂昔。具有扩张血管、降低心肌耗氧量等方面药理作用，近来又发现其具有抑癌作用，因此越来越受到人们的重视［1］。皂昔在高等动物的消化道中不被吸收,故口服无溶血毒性，但其注射剂应用于临床有很小的溶血性，故研究皂昔的溶血性对临床用药安全性评价有很大的作用。PNS的免疫作用已有报道［2］，但其不同极性组分的免疫作用至今未见报道，PNS-5系PNS中极性较大且得率较高的组分，本文旨在探讨PNS-5的溶血性和免疫活性，为PNS提取工艺的优化，PNS的分离纯化及临床合理用药等提供一定的参考。1仪器与试药1.1试药三七药材(泰州医药公司)；黄艮多糖(HQ,含量大于60%,江苏省动物药品工程技术研究开发中心制备);刀豆蛋白A(ConA)、脂多糖(LPS)、嘍瞠蓝(MTT),均为美国Sigma公司产品；其他试剂均为分析纯。1.2动物新西兰大白兔,普通级,体重(2.6±0.2)kg;ICR小鼠(II级),18~22g;均购自扬州大学畜牧兽医学院动物实验中心。2方法2.1PNS-5的制备按文献［3］所报道方法，精制三七总皂昔PNSo将PNS以D101大孔吸附树脂柱初步分离,得到PNS-1,PNS-2,PNS-3,PNS-44个流分。PNS-2再行大孔树脂柱分离，得PNS・5、PNS-6两个流分，各部分单独收集浓缩。取PNS-1.PNS-3-PNS-6共5种样品，以同一展开系统进行TLC鉴定，计算Rf值，初步判断其极性大小为PNS-1>PNS-5>PNS-6>PNS-3>PNS-4,PNS・5系其中得率较高的组分，除PNS-6得率较PNS-5略小外，其他流分的得率均远小于PNS-5O2.2PNS-5溶血性的测定2.2.1红血球细胞悬浮液的制备按文献的方法进行，调整红细胞悬液浓度为2%[2]02.2.2溶血率的计算公式：溶血率二仃i-TO)/(Tmax-T0)x100%oTmax:阳性对照蒸馆水作用组的吸光度；TO:生理盐水作用组吸光度；Ti:不同浓度的皂昔作用时测得的吸光度。2.3PNS-5免疫活性测定2.3.1脾细胞悬液制备无菌操作取小鼠的脾脏，加适量Hanks液研磨，以200目不锈钢网过滤，1500r/min离心5min,弃上清，加Hanks液重复洗涤2次。收集脾细胞，加适量RPMI1640培养液混悬，以0.4%台盼兰活细胞拒染法计数，活细胞数不小于95%,加RPMI1640完全培养液稀释，并调整细胞浓度至1x107个/ml。2.3.2淋巴细胞增殖反应[3]按文献方法进行，并计算其刺激指数(SI)。2.4统计学分析所得数据用(x±s)表示，并用t检验法比较各组间的统计学差异。3结果3.1溶...