蛙血清小分子肽的分离鉴定及生物活性检测［摘要］目的分离和鉴定蛙血清去蛋白提取物中的小分子肽，检测其生物活性。方法用超滤法收集蛙血清中相对分子质量为1000—3000的组分；JURP-HPLC对超滤组分进行分离纯化；用串联质谱法分析鉴定小分子肽的分子质量；用呼吸检压仪测定并计算肝细胞呼吸活性和刺激指数。结果将相对分子质量为1638的小分子肽的二级质谱数据经处理后在数据库搜索，没冇搜索到相关肽的信息，可能是新发现的肽。呼吸活性检测显示小分子肽有很强的呼吸活性，氧系数(Q02)24・0uL02/(mg?h),刺激指数(SI)22.5,强于小牛血清去蛋白注射液。结论蛙血清小分子肽是一种新发现的肽，相对分子质量为1638,其笏效可能优于小牛血清去蛋白注射液。［关键词］蛙血清；小分子肽；呼吸活性［中图分类号］R96［文献标识码］A［文章编号］1673-7210(2016)05(a)-0016-05［Abstract］ObjectiveToisolatedandidentificatedofsmallmolecularpeptidefromthedeproteinizedfrogserumextract,inordertodetectitsbiologicalactivity.MethodsCol1ectingthecomponentswithrelativemolecularweightof1000-3000infrogserumwasusedultrafiltration；separatingandpurificatingtheultrafiltrationcomponentswasusedRP-HPLC；themolecularweightofsmal1molecularpeptideswasanalyzedandidentifiedbytandemmassspectrometry；therespiratoryactivityandstimulationindexoflivercellsweremeasuredandcalculatedbyrespiratorypressuredetector.ResuItsThesecondstagemassspectrometrydataofsmal1molecularpeptidewithrelativemolecularweightof1638wasdisposed,andthenitwassearchedinthedatabase,therewasnorelevantpeptideinformation,maybeitwasanewdiscoveryofthepeptide・Detectionofrespiratoryactivityshowedsmallmolecularpeptideshadverystrongrespiratoryactivity,oxygenquotient(Q02)24.0uL02/(mg?h),andstimulationindex(SI)22.5,itwasstrongerthanincalfserumtoproteininjection.ConclusionThefrogserumsmallmolecularpeptideisanewlydiscoveredpeptide,therelativemolecularweightis1638,theefficacyofthedrugisbetterthanthatofcalfserumalbumininjection.[Keywords]Frogserum；Smallmolecularpeptide；Respiratoryactivity研究表明，动物血清的主要药理活性成分是小分子肽[1]。笔者的前期研究发现蛙血清去蛋白提取物能提高心、脑组织对缺氧的耐受力[2],能保护心、脑缺血再灌注损伤[3-4],说明其含有对心脑缺血缺氧性损伤有保护作用的小分子肽类物质。因此，本研究从蛙血清去蛋白提取物中分离并纯化其中的小分子肽，鉴定小分子肽的分子质量，以期确定其分子结构和名称，并通过测定和计算小分子肽的呼吸活性和刺激指数（SI）,探讨该小分子肽的药效。1材料与方法1.1实验动物SPF级雄性豚鼠1只，体重250-350g,由广东医学院实验动物中心提供[合格证号:SYXK（粤）2013-0007]o1.2药品试剂色谱纯乙腊（北京汇海科仪科技有限公司）；三氟乙酸（TFA,Sigma公司）；10%氢氧化钠溶液（分析纯，广州化学试剂厂）；Soerensen缓冲液（0.0667mol/L）：称取磷酸氢二钠（Na2HP04?2H20,分析纯,广州化学试剂厂）9.72g和磷酸二氢钾（KH2P04,分析纯，广州化学试剂厂）1.65g加双蒸水至1000mL,磷酸调pH值到7.4；Brodie测压液：取氯化钠（分析纯，广州化学试剂厂）23g,牛胆酸钠（分析纯，北京化学试剂公司）5g,伊文兰（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）100mg,加双蒸水至500mL；小牛血清去蛋白注射液（参考对照药，锦州奥鸿药业有限公司，规格：5mL：0.2g）o1.3仪器设备光学显微镜（日本0lympus公司）；UltraflexT0F/T0F型MALDI-T0FMass（Matrix-assistedLaserDesorption/ioniza-tiontime-of-flight）质谱仪（德国Bruker）；MTLLTP0RE8400超滤杯（MILLIPORE）,RMM1000和RMM3000超滤膜（MILLIPORE）；SKW-3微量呼吸检压业公司）；旋涡混匀器（江苏海门麒麟医用仪器厂）。1.4蛙血清小仪器（上海大学）；YQ3型高速匀浆机（江苏江阴县祝塘仪器厂）；恒温水浴箱（余姚电讯仪表实分子肽的分离和鉴定1.4.1超滤蛙血离心取上清...