分子生物学实验报告慕蓝有志班梦想学院目录实验一细菌的培养..............................................................................................................................2实验二质粒DNA的提取..................................................................................................................4实验三琼脂糖凝胶电泳法检测DNA.......................................................................................................7实验四质粒DNA酶切及琼脂糖电泳分析鉴定...............................................................................9实验五聚合酶链反应（PCR）技术体外扩增DNA...........................................................................11实验六植物基因组DNA提取、酶切及电泳分析...........................................................................14实验七RNA分离与纯化..................................................................................................................17实验八RT-PCR扩增目的基因cDNA...................................................................................................19实验九质粒载体和外源DNA的连接反应.......................................................................................21实验十感受态细胞的制备及转化.......................................................................................................23实验十一克隆的筛选和快速鉴定...................................................................................................25实验十二地高辛标记的Southern杂交...............................................................................................27实验十三阿拉伯糖诱导绿色荧光蛋白的表达...................................................................................31思考题......................................................................................................................................................32分子实验心得总结..................................................................................................................................33实验一细菌的培养一、目的学习细菌的培养方法及培养基的配置。二、原理在基因工程实验和分子生物学实验中，细菌是不可缺少的实验材料。质粒的保存、增殖和转化；基因文库的建立等都离不开细菌。特别是常用的大肠杆菌。大肠杆菌是含有长约3000kb的环状染色体的棒状细胞。它能在仅含碳水化合物和提供氮、磷和微量元素的无机盐的培养基上快速生长。当大肠杆菌在培养基中培养时，其开始裂殖前，先进入一个滞后期。然后进入对数生长期，以20~30min复制一代的速度增殖。最后，当培养基中的营养成分和氧耗尽或当培养基中废物的含量达到抑制细菌的快速生长的浓度时，菌体密度就达到一个比较恒定的值，这一时期叫做细菌生长的饱和期。此时菌体密度可达到1×109~2×109/mL。培养基可以是固体的培养基，也可以是液体培养基。实验室中最常用的是LB培养基。三、实验材料、试剂与主要仪器（一）实验材料大肠杆菌（二）试剂1.胰蛋白胨2.酵母提取物3.氯化钠4.1mol/LNaOH5.琼脂粉6.抗生素（氨苄青霉素、卡那霉素等）（三）仪器1.培养皿2.带帽试管3.涂布器4.灭菌锅5.无菌操作台（含酒精灯、接种环、灭菌牙签等）6.恒温摇床四、操作步骤（一）LB培养基的配制配制每升培养基，应在950m1去离子水中加入：细菌培养用胰蛋白胨10g细菌培养用酵母提取物5gNaCl10g摇动容器直至溶质完全溶解，用1mol/LNaOH调节pH位至7.0。加入去离子水至总体积为lL，在15lbf／in2(1.034×105Pa)高压下蒸气灭菌20分钟。这样得到是LB液体培养基。LB固体培养基是在其液体培养基的基础上另加琼脂粉15g/L。（二）细菌的培养（１）在液体培养基中培养1.过夜培养⑴取5ml液体培养...