2014细胞生物学实验第一次实验课内容(细胞膜的通透性巨噬细胞吞噬作用的观察)

实验一细胞膜的通透性【实验目的】了解物质分子质量、脂溶性、电解质和非电解质溶液对细胞膜透性的影响。【实验原理】细胞膜在不断变化的环境中,必须保持自身的稳恒状态,才能生存。细胞膜允许一些物质通透,又能降低甚至阻挡另一些物质的通透,所以细胞膜具有选择通透性。水分子可以自由通过细胞膜,当细胞处于低渗液环境时,水分子大量渗入到细胞内,使细胞膨胀,进而破裂,血红蛋白释放到介质中,由不透明的红细胞悬液变为红色透明的血红蛋白溶液,这就是溶血现象。溶血现象可作为测量物质进人血红细胞速度的一种指标。红细胞置于乙二醇、丙三醇(甘油)、葡萄糖等摩尔浓度的高渗液中,乙二醇等分子进入血红细胞,使细胞内的渗透性活性分子的浓度大为增加,继而导致水的摄入,细胞膨胀,细胞膜破裂,发生溶血。溶血现象发生的快慢与进入细胞的物质的分子质量大小有关分子质量大的进入细胞慢,发生溶血所需的时间也长。非极性化合物易溶于脂溶剂,但在水中溶解度甚小。碳链越长,脂溶性越大。一种化合物在脂溶剂中的溶解度与其在水中溶解度之比,称为分配系数。各种非电解质溶液,只要单位体积中所含的分子数相同,就具有相同的渗透压。电解质溶液,如氯化钠与葡萄糖分子数相等时,氯化钠产生的渗透压要大得多。具有相同渗透压的某非电解质溶液与某电解质溶液浓度之比,称为等渗系数,用i来表示。i=葡萄糖的等渗摩尔浓度/氯化钠的等渗摩尔浓度发生溶血者为低渗液,所以把发生溶血的前一管溶液的浓度近似视为红细胞等渗摩尔浓度。【实验仪器、材料和试剂】(1)仪器、用具:小烧杯、试管、试管架、刻度吸管、注射器、秒表。(2)材料:含适量肝素的鸡血。(3)试剂:lmol/L乙二醇水溶液,lmol/L丙三醇水溶液,lmol/L葡萄糖水溶液,3mol/L甲醇,3mol/L乙醇,3mol/L丙醇,1/8mol/L、1/9mol/L、1/10mol/L、1/12mol/L、1/14mol/L葡萄糖溶液,1/12mol/L、1/13mol/L、1/14mol/L、1/16mol/L、1/18mol/L氯化钠溶液。【方法与步骤】1.分子质量大小对细胞膜通透性的影响(1)在编号的3支试管中,分别用吸管吸入2mllmol/L乙二醇、lmol/L丙三醇,lmol/L葡萄糖高渗液。(2)先后分别滴加两滴血液,用手指按住管口,倒置1次。(3)观察溶血时间,最长延至lOmin。(4)将实验结果列入如下所示的表格中。溶液相对分子质量溶血时间1mol/L乙二醇621mol/L丙三醇921mol/L葡萄糖1802.脂溶性大小对细胞膜透性的影响(1)编号的3支试管分别加入2m13mol/L的甲醇、乙醇、丙醇溶液。(2)分别先后加入两滴血液,按住管口倒置1次。(3)观察溶血时间。(4)将实验结果记入如下所示的表格中。溶液相对分子质量分配系数溶血时间3mol/L甲醇32.040.00973mol/L乙醇46.070.03573mol/L丙醇58.0O.1563.电解质和非电解质溶液对细胞膜透性的影响(1)将试管编号,注明溶质名称及摩尔浓度。(2)按编号分别加入不同浓度的葡萄糖及氯化钠溶液2ml。(3)每管各加入两滴血液,按住管口,倒置一次。(4)室温放置15min,观察发生溶血的浓度,确定等渗浓度。(5)按下表记录实验结果。(6)计算等渗摩尔系数。溶液摩尔浓度1/8M1/9M1/10M1/12M1/13M1/14M1/16M1/18M葡萄糖NaCl试管内液体分两层:上层浅黄色透明,下层红色不透明为不溶血,镜检红细胞完好;如果试管内液体混浊,上层带红色者,称为不完全溶血,镜检有部分红细胞呈碎片状;如果试管内液体变红而透明者,称为完全溶血,镜检发现细胞全部呈碎片状。【讨论】实验中溶血现象发生的机制是什么?对实验中观察到的现象给出合理的解释。实验二小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬实验【目的要求】1.掌握细胞吞噬的实验方法。2.了解细胞吞噬实验的研究意义。【实验原理】吞噬是单细胞动物摄取营养物质的主要方式,也是高等动物的一种非特异性免疫防护机制。高等动物内的巨噬细胞、单核细胞和中性粒细胞等具有吞噬功能,当病原微生物或其他异物侵入机体时,巨噬细胞由于具有趋化性,会向异物处聚集,将其内吞入胞质,形成吞噬泡,然后吞噬泡与溶酶体融合,将异物消化分解。通过观察细胞对鸡红细胞、酵母菌等的吞噬,计算吞噬百分率和吞噬指数,可以分析判断机体的免疫水平。【实验用品】1.器材:显微镜、解剖盘、剪...

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