刘钰，女，1991年生，江西省丰城市人，汉族硕士，主要从事组织工程研究。通讯作者：孟琴，教授浙江大学化工系联合反应所，浙江省杭州市310027:R318文献标识码:A:2095-4344(2016)46-06915-07稿件接受：2016-09-03体外构建3D人工皮肤刘钰，沈冲，孟琴(浙江大学化学工程与生物工程学院，浙江省杭州市310027)引用本文：刘钰，沈冲，孟琴.体外构建3D人工皮肤[J].中国组织工程研究，2016，20(46):6915-6921.DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.2016.46.010ORCID:0000-0002-4320-9221(刘钰)文章快速阅读：文题释义：角质细胞培养方法：目前有2种方法，一种用特定的无血清培养基，如M199、F12MCDB153、KSFM、KGM，优点是无需饲养层细胞、培养方法简便易行；一种用鼠成纤维细胞系(NIH3T3)或者鼠胚胎成纤维细胞作饲养层，角质细胞铺在丝裂霉素C处理过的成纤维细胞饲养层上，优点是培养基含血清和高钙，细胞生长快传代方便，缺点是细胞更容易分化，传代次数低于3次。体外构建人工皮肤：最初用饲养层来构建二维共培养模型，缺点是形成的皮肤寿命短，不能形成几层有序的角质层。其次将角质细胞种植于胶原包埋的成纤维细胞上，浸没培养7d，随后气提培养获得人工皮肤，这一方法存在皮肤构建过程中胶原降解、胶原易收缩的缺点。目前已有研究采用3D打印人工皮肤，不过存在成本高、成功率不高、皮肤表皮层不能分化为多层等缺陷。摘要背景：已有研究采用3D打印人工皮肤，但存在皮肤表皮层不能分化为多层等缺陷。目的：优化人工皮肤的构建方法，获得更好的人工皮肤。方法：从牛尾和鼠尾中分别提取与纯化胶原。从儿童包皮组织中分离培养原代成纤维细胞和角质细胞，再以牛尾(或鼠尾)胶原包埋成纤维细胞，构建真皮层；将角质细胞接种于含鼠尾(或牛尾)胶原包埋的成纤维细胞上培养7d，再气提培养7d，获得人工皮肤。观察人工皮肤的收缩性、水接触角，并进行苏木精-伊红染色、天狼猩红染色及免疫荧光染色。结果与结论：①鼠尾胶原构建人工皮肤真皮层面积下降了50%，牛尾胶原构建人工皮肤真皮层面积只下降了21%；②牛尾胶原构建人工皮肤的接触角与人皮肤接近，比鼠尾胶原构建人工皮肤的疏水性更好；③天狼猩红染色结果显示，与鼠尾胶原构建的人工皮肤相比，牛尾胶原构建人工皮肤的胶原折光性更强，胶原排列更有序，纤维更粗；④苏木精-伊红染色显示，与鼠尾胶原构建人工皮肤相比，牛尾胶原构建人工皮肤真皮层的表皮可形成更多层；⑤结果表明，将角质细胞接种于牛尾胶原包埋的成纤维细胞上，可构建更好的人工皮肤。关键词：组织构建；组织工程；人工皮肤；角质细胞；成纤维细胞；胶原；细胞角蛋白14；饲养层；表皮；国家自然科学基金主题词：皮肤，人工；成纤维细胞；胶原；组织工程基金资助：国家自然科学基金(21476197)3D人工皮肤的体外构建从牛尾和鼠尾中分别提取与纯化胶原从儿童包皮组织中分离培养原代成纤维细胞和角质细胞牛尾(或鼠尾)胶原包埋成纤维细胞，构建真皮层将角质细胞接种于含鼠尾(或牛尾)胶原包埋的成纤维细胞上培养7d，再气提培养7d，获得人工皮肤结果表明，将角质细胞接种于牛尾胶原包埋的成纤维细胞上，可构建更好的人工皮肤LiuYu,Master,SchoolofChemicalEngineeringandBiologicalEngineering,Zhe激angUniversity,Hangzhou310027,Zhe激angProvince,ChinaCorrespondingauthor:MengQin,Professor,SchoolofChemicalEngineeringandBiologicalEngineering,Zhe激angUniversity,Hangzhou310027,Zhe激angProvince,ChinaArtificialskinpreparationusingthree-dimensionalprintinginvitroLiuYu,ShenChong,MengQin(SchoolofChemicalEngineeringandBiologicalEngineering,Zhe激angUniversity,Hangzhou310027,Zhe激angProvince,China)AbstractBACKGROUND:Epidermisisunabletodifferentiateintostratumcorneumandotherpartsinthepreviousartificialskinconstructedusingthree-dimensionalprinting.OBJECTIVE:Tooptimizethemethodofartificialskinconstructiontoobtainmorefeasibleartificialskin.METHODS:TypeIcollagenextractedfromrat-tailandbovinetailwaspurified.Primarydermalfibroblastsandkeratinocyte...