shRNA干扰VEGF表达对白血病细胞多药耐药的影响作者：方莉莉，许文林，陈琛，房新建，陈巧云，李娟【摘要】目的：探讨血管内皮细胞生长因子（VEGF）与人白血病耐药细胞株K562/A02细胞多药耐药的关系及其机制。方法：针对VEGF基因设计合成3条干扰片段shRNA1，2，3，采用脂质体2000分别将其转染入K562/A02细胞，RTPCR法检测VEGF和多药耐药相关基因MDR1，MRP1，topoⅡ，GST的mRNA水平；蛋白质印迹法检测VEGF蛋白水平；MTT法检测各组细胞对多柔比星的半数抑制浓度（IC50值）。结果：K562/A02细胞VEGFmRNA表达水平显著高于敏感株K562细胞，差异有统计学意义（P《0.01），且VEGF蛋白水平也显著高于K562细胞；转染shRNA后，K562/A02细胞中VEGFmRNA水平出现不同程度下调，其中shRNA2组和shRNA3组与转染随机片段组比较差异有统计学意义（P《0.05），以shRNA3组下调最显著，并且VEGF蛋白水平也出现相应的下调；转染48h后K562/A02细胞中MDR1，MRP1及topoⅡ的mRNA水平均出现不同程度下调，以shRNA3组下调最显著，分别下调（39.7±1.21）％，（29.1±0.97）％，（28.2±1.04）％，GST基因表达则无明显变化；阳性转染组细胞对多柔比星的敏感性明显增加，其中以shRNA3组最显著。结论：VEGFshRNA可以抑制K562/A02细胞VEGF基因与蛋白的表达，不同干扰片段的沉默效果不同，并增强K562/A02细胞对多柔比星的敏感性，其机制可能与MDR1，MRP1及topoⅡ的表达下调有一定的关系。【关键词】血管内皮生长因子；RNA干扰；K562/A02细胞；多药耐药［Abstract］Objective:Tostudytherelationshipbetweenvascularendothelialgrowthfactor(VEGF)andmultidrugresistanceofhumanleukemiacelllineK562/A02byRNAinterference,andthenthemechanismwasexplored.Methods：TheVEGFshRNAchain1,2and3weredesigned,synthesized,thentransfectedintoK562/A02cellslinebylipofectamine2000reagent.RTPCRwasusedtodetecttheexpressionofVEGFandMDRrelatinggenesMDR1,MRP1,topoⅡ,GSTinmRNAlevel;WesternblottingwasusedtoanalyzedtheexpressionofVEGFinproteinlevel;MTTwasusedtodeterminetheIC50oftransfectionalcellstodoxorubicin.Results：ComparedtoK562cell,theexpressionofVEGFinK562/A02cellwasevenmore(P《0.01),andafterVEGFshRNAsweretransfectedintoK562/A02cells,theexpressionofVEGFatthemRNAlevelweredecreased,andtherewerestatisticaldifferencebetweenVEGFshRNA2grouporVEGFshRNA3groupandHKgroup(P《0.05),thegreatestdecreasewasseenincellstransfectedwithVEGFshRNA3;andtheproteinlevelofVEGFwerealsodownregulated.TheMDR1,MRP1,topoⅡmRNAofK562/A02cellweresignificantlydecreased;thegreatestdecreasewasseeninVEGFshRNA3---本文于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---group.TheIC50valueofpositivelytransfectedgroupwerelowerthanthatofcontrolgroups.Conclusion：AftersilenceofVEGFbyshRNA,themRNAexpressionofMDRassociatedgenessuchasMDR1,MRP1andtopoⅡinK562/A02cellsweredownregulated,andthesensitivityofK562/A02celltodoxorubicinwereincreased.［Keywords］vascularendothelialgrowthfactor;RNAinterference;K562/A02cells;multidrugresistance多药耐药（MDR）目前仍是急性白血病（AL）治疗的主要障碍，尽管新的化疗药物和化疗方案不断涌现，但仍有部分患者因化疗耐药而导致治疗失败。白血病细胞的耐药往往同时存在数种耐药机制，MDR1，MRP1等耐药相关基因的高度表达是白血病产生多药耐药的主要原因之一。血管内皮细胞生长因子（VEGF）作为最重要的促血管生成因子之一，在肿瘤增殖、浸润和转移中起着重要作用。最近的研究表明［1］，在急性白血病初诊、缓解、难治/复发各组骨髓及外周血中，VEGF水平均高于正常对照组，特别是在难治/复发性AL患者中，VEGF的表达水平最高，表明VEGF水平的变化和白血病病情、预后密切相关。因此，我们采用RNA干扰技术阻断白血病细胞株K562/A02细胞中VEGF的自分泌作用，观察细胞对药物敏感性的变化，并针对VEGF...