心内科学专业优秀论文2型糖尿病患者血浆及其高密度脂蛋白对细胞内胆固醇外流的影响;不同剂量雌激素对小鼠心脏和肾脏结构和功能的影响关键词：糖尿病ABCA1表达ABCG1表达胆固醇流出高密度脂蛋白雌激素摘要：背景：2型糖尿病患者常有血脂异常。已证实2型糖尿病患者的胆固醇逆转运途径存在异常，而细胞内胆固醇外流是胆固醇逆转运途径的重要的初始步骤，本研究主要针对胆固醇外流这一步骤进行探讨。以往的研究证实，2型糖尿病患者细胞内的胆固醇外流的能力可能是降低的。如：从培养的纤维母细胞到含高糖的血浆的胆固醇转运是降低的，胆固醇从Fu5Ah细胞流出到糖尿病血浆的能力也是受损的。但近期也有研究显示，1型糖尿病血浆诱导Fu5AH细胞和高表达ABCAl的HSF细胞的胆固醇外流的能力反而是升高的。糖尿病患者血浆成分变化较为复杂，许多因素可以影响胆固醇外流。如血浆中胰岛素含量，血糖水平，细胞因子水平，脂蛋白糖化情况等，胆固醇外流率并不能完全取决于HDL。因此，糖尿病患者血浆中非脂质成分的异常，还是HDL质或量的异常在影响细胞内胆固醇流出方面起主要作用，至今仍不明确。在胆固醇逆转运的第一步一胆固醇从外周细胞流出中，ABCAl，SR-BI是迄今为止研究最多的促进胆固醇流出的细胞表面蛋白。近期发现的ABCG1也是在胆固醇流出和流入途径中均起到重要作用的半转运体。除了通过ABCAl，ABCGl，SR-BI途径外，细胞内的胆固醇还可以通过ABCG4、ABCG5、自由扩散等多种方式流出。多个文献显示，有些细胞可以表达相对单一的介导胆固醇转运的细胞表面蛋白，因而可以利用这些细胞相对专一地研究某个细胞表面蛋白对胆固醇外流的作用。文献显示，体外的细胞胆固醇流出实验能够预测糖尿病和非糖尿病患者动脉粥样硬化的病变程度。因此，通过对细胞内胆固醇外流的体外实验研究，我们希望能够间接了解2型糖尿病患者体内外周细胞胆固醇外流的情况。研究目的：1．了解HepG2、HSF、HUVEC细胞SR～BI、ABCAl、ABCGl表达的情况。2．通过对2型糖尿病患者的HDL、无脂血浆及全血血清对经由ABCAl，SR-BI胆固醇流出途径的研究，并与非2型糖尿病组比较，了解2型糖尿病患者血清及其HDL影响细胞内胆固醇外流的特点。方法：1．原代分离和培养HSF和HUVEC细胞。2．RT-PCR和WesternBlot方法鉴定三种HepG2、HSF、HUVEC细胞上ABCAl、SR-BI、ABCGl含量。3．使用超速离心方法分离非2型糖尿病组(对照组)和2型糖尿病组患者血浆中HDL和LPDS，并用苏丹黑染色鉴定。4．给实验细胞负载H<,∞>标记的胆固醇，分别用非2型糖尿病组和2型糖尿病组的血清、LPDS、HDL诱导HepG2和HSF细胞内胆固醇外流，测定胆固醇流出率。5．将22-OH胆固醇刺激前后的HSF的胆固醇流出率之差作为经由ABCAl途径的胆固醇流出率。HepG2的胆固醇流出率作为经由SR-BI途径的胆固醇流出率。6．用荧光标记的方法测定两组PLTP和CETP的活性。7．将胆固醇流出率与患者的基础资料、PLTP、CETP活性等进行相关性分析。8．统计分析：采用SPSS13.0软件进行统计分析。结果：1．使用组织贴块培养法可成功分离培养HSF细胞。2．使用胶原酶灌注分离法可快速成功分离培养HUVEC细胞，培养过程须添加生长因子复合物。3．用RT-PCR和WesternBlot方法证实，HepG2细胞可高表达SR-BI，而HSF和HUVEC细胞在22-OH胆固醇刺激后可分别高表达ABCAl和ABCGl。4．超速离心分离法可较好的分离出纯度较高的HDL和LPDS。5．2型糖尿病组的HDL诱导HepG2细胞胆固醇外流能力较对照组明显减弱(P=0.0015)。6．2型糖尿病组的血清诱导HepG2细胞胆固醇外流的能力较对照组无明显差异(P=0.19)。7．2型糖尿病与对照组相比的HDL诱导22-OH胆固醇刺激ABCAl高表达前后的胆固醇流出率差值，在两组之间没有明显差异。8．全血血清诱导的22-OH胆固醇刺激前后的胆固醇流出率差值在2型糖尿病组较对照组差异无显著性(对照组VS2型糖尿病组，5.7±4.4％VS8.8±5.9％，P=0.33)。9．LPDS诱导的22-OH胆固醇刺激前后胆固醇流出率之差在对照组明显升高(对照组VS2型糖尿病组，11.0±7.7％VS6.6±4.7％，P=0.02)。10．2型糖尿病患者血清PLTP活性较对照组升高，与对照组和全部患者的经由ABCAl的胆固醇流出呈正相关。两组的CEI、P活性无...