第２８卷第１期２００８年１月南京医科大学学报（自然科学版）ＡＣＴＡＵＮＩＶＥＲＳＩＴＡＴＩＳＭＥＤＩＣＩＮＡＬＩＳＮＡＮＪＩＮＧ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ）・３３・血管内皮生长因子在大肠杆菌中表达、提纯及功能测定程虹，金庆文，姚娟，邓晓萱，万琪，丁新生，季晓辉１２１００２９；１南京医科大学微生物教研室，江苏南京２１００２９）（南京医科大学第一附属医院神经内科，江苏南京［摘要］目的：利用细菌表达系统合成大量重组血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）蛋白。方法：将ＶＥＧＦ１６５ｃＤＮＡ克隆于表达载体结果：重组ＶＥＧＦ蛋白经ＰＥＴ－３２ａ（＋）后转染ＢＬ－２１株表达重组ＶＥＧＦ蛋白，用分离Ｈｉｓ蛋白的层析柱提纯重组ＶＥＧＦ蛋白。氨基酸序列测定证实。功能测定发现重组ＶＥＧＦ蛋白可阻断细胞表面Ｎｅｕｒｏｐｉｌｉｎ－１的表达。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ测定发现Ｈｉｓ蛋白。结论：上述表达系统制备大量具有生物活性的重组ＶＥＧＦ蛋白［关键词］血管内皮生长因子；ＰＥＴ－３２ａ（＋）表达载体；Ｎｅｕｒｏｐｉｌｉｎ－１［］Ｒ３９２．１１［文献标识码］Ａ［］１００７－４３６８（２００８）０１－０３３－０４Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆＶＥＧＦｉｎＥ．ＣｏｌｉＣＨＥＮＧＨｏｎｇ，ＪＩＮＱｉｎｇ－ｗｅｎ，ＹＡＯＪｕａｎ，ＤＥＮＧＸｉａｏ－ｘｕａｎ，ＷＡＮＱｉ，ＤＩＮＧＸｉｎ－ｓｈｅｎｇ，ＪＩＸｉａｏ－ｈｕｉ１（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＮｅｕｒｏｌｏｇｙ，ｔｈｅＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＮＪＭＵ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００２９；１ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙａｎｄＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，ＮＪＭＵ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００２９，Ｃｈｉｎａ）［Ａｂｓｔｒａｃｔ］---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｍａｋｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ（ＶＥＧＦ）ｉｎＥ．Ｃｏｌｉ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＴｈｅＶＥＧＦｃＤＮＡｗａｓｃｌｏｎｅｄａｎｄｐｕｔｉｎｔｏｔｈｅｂａｃｔｅｒｉａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｙｓｔｅｍＰＥＴ３２ａ（Ｎｏｖａｇｅｎ）ｉｎｆｒａｍｅｗｉｔｈｈｉｓｔｉｄｉｎｅｔａｇ．ＡｆｔｅｒｉｎｔｒｏｄｕｃｉｎｇｉｎｔｏｔｈｅＢＬ２１（ＤＥ３）Ｅｃｏｌｉｈｏｓｔ，ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＶＥＧＦ１６５ｐｒｏｔｅｉｎｗａｓｐｒｏｄｕｃｅｄａｎｄｐｕｒｉｆｉｅｄｂｙｄｅｎａｔｕｒｉｎｇｃｏｎｄｉｔｉｏｎｏｎｔｈｅＨｉｓ－ｂｉｎｄｒｅｓｉｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＴｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｔｅｉｎｗａｓｃｏｎｆｉｒｍｅｄｂｙＡＡｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．ＴｈｅｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｄＶＥＧＦ１６５ｗａｓｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄｂｙｉｔｓｒｅｃｅｐｔｏｒＮｅｕｒｏｐｉｌｉｎ－１ａｎｄｃｏｕｌｄｏｂｓｔｒｕｃｔｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＮｅｕｒｏｐｉｌｉｎ－１ｉｎｃｅｌｌｃｕｒｆａｃｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ｐＥＴ３２ａ／ｈｕｍａｎＶＥＧＦ１６５ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｗａｓｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｉｎｔｏＥ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）ａｎｄｐｒｏｄｕｃｅｄａｌｏｔｏｆｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎＶＥＧＦ１６５．［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ＶＥＧＦ；ＰＥＴ３２ａｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒ；Ｎｅｕｒｏｐｉｌｉｎ－１［ＡｃｔａＵｎｉｖＭｅｄＮａｎｊｉｎｇ，２００８，２８（０１）：０３３－０３６］血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）是调节机体血管形成的重要因子，它对各类神经细胞具有直接的调节作用。研究显示ＶＥＧＦ在肌萎缩性侧束硬化症（ＡＬＳ）及其他神经系统变性病中起重要作用［１－４］Ｕ８７细胞由美国ＮＩＨＡＩＤＳＲｅｓｅａｒｃｈ＆Ｒｅｆｅｒ－ｅｎｃｅＲｅａｇｅｎｔ提供；ＴＲＩｚｏｌｒｅａｇｅｎｔ（Ｉｎｖｉｔｒ...