内科学(血液病)专业优秀论文CathepsinD表达水平变化对Raji细胞增殖及阿霉素敏感性的影响关键词：组织蛋白酶淋巴瘤阿霉素化疗敏感性肿瘤细胞摘要：目的：组织蛋白酶D（Cath-D）是一种酸性溶酶体的蛋白水解酶，在pH2．8～5．0范围内能降解有结构、功能的蛋白质、多肽、肽前体及激素。此外，该酶在多种组织的重构、改建和凋亡中亦具有重要活性作用。近年来许多研究发现Cath-D表达水平改变与多种肿瘤细胞（乳腺癌、卵巢癌、人神经胶质瘤、喉癌、肺癌、肠癌、白血病、淋巴瘤等）的增殖和凋亡密切相关。本文旨在探讨Cath-D在人淋巴瘤细胞株Raji中的表达水平变化对Raji细胞增殖和阿霉素（ADM）敏感性的影响。方法：1．细胞株及细胞培养人淋巴瘤细胞株Raji购自上海生物化学与细胞生物学研究所，用含10％胎牛血清的1640培养基在37℃、5％CO2的温箱内培养，2～3d传代1次，实验时取对数生长期细胞。2．研究方法将对数生长期Raji细胞分为5组：①空白对照组，即Raji细胞未作任何处理；②二甲基亚砜（DMSO）对照组：因实验用胃酶抑素A（PepA）溶于有机溶剂DMSO，故设立等量DMSO对照组；③PepA处理组，单用100μmol/LPepA处理Raji细胞16h；④ADM处理组，单用3．15μg/mL（48hADM的半数抑制浓度（IC50））处理Raji细胞48h；⑤PepA+ADM处理组，即Raji细胞先与100μmol/LPepA预培养16h，再用3．15μg/mLADM处理48h。四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测不同密度Raji细胞的增殖曲线，据此选取适宜用来进行48h内Raji细胞的增殖活性测定的细胞密度。MTT法测定细胞增殖抑制率，以ADM的48hIC50作为本实验的工作浓度。Westernblot法检测ADM处理前后各组Raji细胞Cath-D表达水平的变化。MTT法检测用PepA预处理后，Raji细胞对ADM敏感性的变化。3．统计学处理所有数据均用DPSV3．11专业版软件分析。数据采用x±s、百分率表示，多组间均数比较采用方差分析，两组间均数比较采用t检验，两参数间的相关性采用Spearman等级检验。结果：1、在72h之内，细胞密度为1×103～5×104/mL范围内，随时间延长，细胞呈线性关系生长（图1）。细胞悬液密度为5×103/mL时，72h内MTT测定的OD值在可信区间范围内，且与时间呈良好的线性关系，适宜用来进行48h内Raji细胞的增殖活性测定。2、ADM工作浓度浓度为1、2、4、8、16μg/mL的ADM作用于Raji细胞48h后的抑制率分别为（17．59±14．26）、（44．20±6．05）、（64．61±2．52）、（73．82±3．32）和（79．36±1．21）％。48hADM的IC50为3．15μg/mL，并以此药物浓度为工作浓度进行各项实验。3．光学显微镜下细胞形态学变化:光学显微镜结果显示正常培养条件下Raji细胞为饱满的圆形，悬浮生长，突起较少，胞体透亮，折光性好，胞内颗粒较少，相邻细胞生长融合成片，生长状态良好。经ADM处理后，胞体内颗粒逐渐增多，细胞间连接消失，胞体变大或收缩、出泡，细胞核高度凝聚，或者碎裂呈梅花样，细胞形态变得模糊，不完整，有的可见凋亡小体形成，随着作用浓度增高，凋亡细胞数增多，凋亡形态更明显。4、处理前后各组Cath-D表达水平变化Cath-D在Raji细胞中有表达，与空白对照组相比，DMSO对照组的Cath-D表达水平无明显变化，PepA处理组和PepA+ADM处理组的Cath-D表达均有下降，两组的下降程度无统计学差异；而单用ADM处理组Raji细胞中Cath-D表达增高。5、Cath-D对Raji细胞增殖的影响MTT结果显示，DMSO对照组和单用PepA处理---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---组，Raji细胞增殖均无变化，而ADM处理组及PepA+ADM处理组均明显抑制Raji细胞增殖，且PepA+ADM处理组的细胞增殖抑制率显著低于ADM处理组。结论：1．与空白对照组相比，DMSO对照组Cath-D表达水平和Raji细胞增殖均无变化，证明本实验所用剂量的有机溶剂DMSO对实验结果无明显影响。PepA处理组和PepA+ADM处理组的Cath-D表达均有下降，表明本实验所用剂量的PepA能有效抑制Cath-D表达。2．与空白对照组相比，PepA处理组Cath-D表达下降，但该组Raji细胞增殖无变化，提示在无化疗药ADM作用下，Cath-D表达水平变化对细胞增殖和凋亡无影响；3．与空白对照组相比，PepA+ADM处理组的Cath-D表达下...