大肠癌癌变过程中PI3K的表达及意义杨勇1林琳2刘日旭3王乙3刘明开3(1大连市妇幼保健院检验科辽宁大连116033;2大连市友谊医院心内科116033)(3大连大学附属新华医院检验科辽宁大连116021)【摘要】目的：研究PI3K在大肠癌癌变过程中的表达及临床意义。方法：选取72例大肠癌组织和癌旁组织，应用RT-PCR法，对PI3K在大肠癌中的基因水平进行检测。结果：新鲜的大肠癌癌组织中的PIK3R1基因表达量显著高于癌旁正常黏膜组织中的表达量，具有统计学意义(t=-2.75,P《0.05)o结论：PI3K在大肠癌的发生、发展过程中起重要作用。【关键词】大肠癌磷脂酰肌醇3-激酶RT-PCR【】R730.231【文献标识码】A【】1672-5085(2014)25-0012-02ExpressionandsignificanceofPI3KintheprogressionofcolorectalcancerYANGYonglAINLin2,LIURi-xu3,WANGYi3,LIUMing-kai3(1,DepartmentofClinicalLaboratory,DalianWomenandChildrenHealthHospital,Dalian116033,China;2,DepartmentofCardiology,DalianMunicipalFriendshipHospital,Dalian116001,China;3,DepartmentofClinicalLaboratory,XinhuaHospitalAffilicatedtoDalianUniversity,Dalian116021,China)【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheexpressionandclinicalsignificanceofPI3Kintheprogressionofcolorectalcancer.MethodsThegenelevelofPI3Kwasdetectedin72pairscolorectalcarcinomaandthecorrespondingcontroltissuesamplesusingRT-PCR.ResultsTheexpressionlevelsofgenesPIK3R1incolorectalcarcinomawereobviouslyhigherthanthatofinthenormalcolorectaltissue,withstatisticalsignificance(t=-2.75，P《0.05)•ConclusionPI3Kplaysanimportantroleintheoccurrenceanddevelopmentofcolorectalcancer.【Keywords]colorectalcancerthephosphoinositide3-kinaseRealTimePCR大肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，近年来发病率及死亡率呈迅速上升趋势，死亡的主要原因是肿瘤的侵袭和转移，早期诊断及发现转移病灶对于治疗及判断患者预后冇着重要意义。信号转导通路的异常改变是肿瘤细胞的重要生物学特征,多种研究表明，磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路参与了多种因子介导的肿瘤血管生成过程，其活化与肿瘤的发生、侵袭和转移密切相关[1】。本实验同时采用RT-PCR法检测大肠癌组织和癌旁正常黏膜组织中PIK3R1的水平,初步探讨其在大肠癌癌变过程中的作用。1材料与方法1.1病例资料：72例患者均为2011年3〜12月肛肠外科住院病人，经临床及病理组织学确诊的原发性大肠癌，术前未行放疗、化疗等抗肿瘤治疗，无大肠癌家族史。苏中男40例，女32例；年龄46〜79岁，平均62.4岁。1.2标本：以大肠癌新鲜组织作为疾病组，癌旁正常黏膜组织(距肿瘤边缘8cm以上)作为对照组。新鲜组织标本采集后迅速经液氮保存，待进行RT-PCR检测。1.3实验方法：应用RealTimePCR方法对大肠癌患者组织标本进行PIK3R10的基因mRNA相对表达量的分析。1.3.1实验试剂：提取试剂使用TaKaRaRNAisoPlusReagent；RT-PCR试剂使用PrimeScriptRTreagentKitwithgDNAEraser及SYBRPremixExTaq(TliRNaseHPlus)。以上试剂均购于大连宝生物公司。1.3.2主要仪器：使用NanoDrop?ND-1000测定RNA在分光光度计260nm、280nm的吸收值，计算浓度并评估纯度。进行变性琼脂糖凝胶电泳，以检测RNA纯度及完整性。使用TaKaRaPCRThermalCyclerDice(TaKaRaCode.TP600),进行RT反应;使用TaKaRaPCRThermalCyclerDiceRealTimeSystem(TaKaRaCode.TP800)进行PCR反应。1.3.3实验方法：应用SYBRGreenI荧光染料嵌合法，以1个患者的组织样本TotalRNA反转录获得的cDNA作为标准品，分别对管家基因(Actb)和0的基因(PIK3R1)制作标准曲线；然后再分别对各样本的管家基因和B的基因进行定量实验，通过管家基因的校正，对各样本中目的基因的相对表达量进行分析。1.3.4引物序列：见表1。表1RT-PCR对座的引物及产物大小1.4统计分析：结果以Meanplusmn;SD表示，并采用Excel和SPSS13.0软件对实验结果和临床资料进行数据整理和统计，以t检验进行统计学分析，P《0.05具冇统计学意义。2结果2.1TotalRNA质量确认：电泳结果显示(图1)，RNA完整性较好；0D...