鳜胃蛋白酶原基因cDNA全长的克隆与序列分析吴雪峰，赵金良（上海水产大学农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室，上海200090）关键词：鳜；胃蛋白酶原；cDNA末端快速扩增；克隆；序列分析中图分类号：S917文献标识码：ACloningandsequencingofthefull-lengthcDNAofpepsinogengenefromtheMandarinfish，SinipercachuatsiWUXue-Feng,ZHAOJin-Liang(KeyLaboratoryofAquaticGeneticResourcesandAquaculturalEcosystemCertificatedbytheMinistryofAgriculture,ShanghaiFisheriesUniversity,Shanghai200090,China)Abstract:Pepsinogenisonekindofgastricdigestiveproteinasesbelonglingtoafamilyofasparticproteinases,whichissynthesizedinthegastricmucosaofvertebratesandconvertedtopepsinsintheacidicenvironmentofgastricjuice.Themandarinfish(Sinipercachuatsi)isatypicalcarnivorousfishwhichonlypreyonsmalllivefishesafterhatching.Inordertounderstandthemolecularcharactersofpepsinogeninfish,thefull-lengthcDNAofpepsinogengeneofS.chuatsiwasclonedbymeansofRT-PCRandrapidamplificationofcDNAends(RACE)andsequenced.Theresultrevealsa1367bpcDNAfull-lengthsequencecontaining43bp5′-untranslatedregion,187bp3′-untranslatedregionand1137bpopenreadingframe(ORF),whichencodes378aminoacidswithcharacteristicsignalpeptidesandactivationpeptides.ThepepsinogenofS.chuatsialsohashighlyconservedaminoacidresiduesessentialforcatalyticactivityandconformationalmaintenance,whicharetwoessentialaspartylresiduesintheactivesiteandsixcysteineresiduesinvolvedinformingthreedisulphidebonds.ThehomologyofaminoacidsequencesbetweenpepsinogenofS.chuatsiandothervertebratepepsinogensrangesfrom59.9%to91.2%,whichindicatesthepepsinogengeneishighlyconservedinevolution.TheNJphylogenetictreeofvertebratesfromtheaminoacidssequencesofpepsinogenshowedallfishwereclusteredasagroup,thepepsinogenofS.chuatsiwasthemostclosetopepsinogenAformⅡaofwinterflounder.ThesuccessfulcloningofpepsinogengenefromS.chuatsinotonlylaysthefoundationforfurtherstudyofitstemporalandspatialexpression,butalsoprovidesnewmaterialforthemolecularcharacteristicandevolutionoffishpepsinogen.Keywords:Sinipercachuatsi;pepsinogen;rapidamplificationofcDNAends;cloning;sequenceanalysis收稿日期：2007-07-19资助项目：上海市重点学科建设项目(Y1101)、上海水产大学水产养殖重点学科开放课题(04SC11)、上海水产大学博士启动基金作者简介：吴雪峰（1982一）,男,江苏宜兴人,硕士研究生,主要从事水产动物遗传育种。E-mail:luckyfeng_82@yahoo.com.cn通讯作者：赵金良,E-mail:jlzhao@shfu.edu.cn1胃蛋白酶原（pepsinogen）是胃蛋白酶的前体，胃蛋白酶是胃里特有的一种具有消化功能的蛋白酶，其活性部位具有两个天冬氨酸残基，属于天冬氨酸蛋白酶家族[1]。哺乳动物中，胃蛋白酶是以无活性的酶原（即胃蛋白酶原）形式、由胃上皮主细胞分泌，在HCl的作用下，胃蛋白酶原激活，自动水解形成胃蛋白酶。胃粘膜中胃蛋白酶原和胃液中胃蛋白酶的含量很高，所以通过一些分离技术（如硫酸铵分馏法）可以得到大量的胃蛋白酶原和胃蛋白酶[2]。胃蛋白酶原和胃蛋白酶的酶学、蛋白质化学包括它们的作用模式、一级结构、三级结构和功能研究较为广泛深入[3-4]，胃蛋白酶原还可以作为胃上皮细胞发育[5]和胃疾病诊断[6]的分子标记。目前，在哺乳动物中已经发现5种类型的胃蛋白酶原：胃蛋白酶原A、胃蛋白酶原B、胃蛋白酶原C（前胃亚蛋白酶）、胃蛋白酶原F和胃蛋白酶原Y（凝乳酶原）。鳜（Sinipercachuatsi）自古以来一直是我国最重要的淡水名贵经济鱼类，具有生长快、肉质鲜嫩、少刺的特点，享有“淡水石斑鱼”的美誉。鳜为典型的肉食性鱼类，自开食起终生以活鱼虾为食，且十分顽固，因而，饵料成为鳜大规模养殖发展的主要限制因素之一。国内学者对鳜消化酶活性方面已有一些...