液基细胞学、HPV—DNA及hTERC基因联合检测在宫颈癌筛查中的应用价值［摘要］目的探讨TCT、HPV-DNA及hTERC基因联合检测在宫颈癌筛查中的应用价值。方法对480例筛查者分别进行TCT、HPV-DNA和hTERC基因检测，并以病理学检测结果为参照标准，对三种检查方法的敏感度、特异度及符合率进行分析。结果480例受检者中，TCT检测异常49例，HPV阳性54例，hTERC基因扩增阳性29例。单一筛查时，TCT灵敏度最高，hTERC特异度和符合率最高；联合筛查时，TCT+HPV(+)灵敏度最高，HPV+hTERC(+)特异度和符合率最高，单项筛查和联合筛查的检出率均与病理级别有关(P［关键词］宫颈癌；HPV-DNA；hTERC基因；联合检测；早期诊断［中图分类号］R737.3［文献标识码］A［文章编号］1673-9701(2016)17-0009-04TheapplicationvalueofcombineddetectionofTCT,HPV-DNAandhTERCgenesinscreeningofcervicalcancerZHAORunzhenDepartmentofPathology，FenyangHospitalofShanxiProvince,Fenyang032200，China[Abstract]ObjectiveTostudytheapplicationvalueofcombineddetectionofTCT，HPV-DNAandhTERCgenesinscreeningofcervicalcancer.Methods480subjectswereexaminedbyTCTtesting,HPV-DNAandhTERCgenesdetection.Thesensitivity，specificityandcoincidencerateofthethreemethodswerestudiedwiththeresultsofpathologicalexaminationasthereferencestandard.ResultsIn480subjects，abnormalitieswerefoundin49casesbyusingTCTtesting,further,54caseswereHPV-positive，andamplificationpositivePCRproductofhTERCgeneweredetectedin29cases.Single-armscreeningresultsindicatedthatTCThadthehighestsensitivity，andhTERChadthehighestspecificityandcoincidencerate；bycombinedscreening,thesensitivityofTCT+HPV(+)wasthehighest，whiletheHPV+hTERC(+)hadthehighestspecificityandcoincidencerate.Bothsingle-armscreeningandcombinedscreeningwerecorrelatedwithhistologicalgrades，withstatisticalsignificance(P1资料与方法1.1一般资料以我院2013年4月〜2014年12月期间接收的480例筛查者作为研究对象，均有性生活史，年龄24〜61岁，平均（42.6±5.3）岁，排除存在宫颈活检和手术上皮内瘤变和生殖系统恶性肿瘤疾病史以及妊娠期间和哺乳期的妇女。1.2仪器与试剂本组研究均在筛选者知情下进行，所有仪器有离心机（包括冷冻高速离心机、八连管离心机和自动平衡离心机）、自动制片机、微量加氧枪、涡旋振荡器、电热恒温水浴箱和培养箱、荧光显微镜等；试剂除hTERC和HPV检测试剂盒外，固定液和乙醇均自行配制，包括甲醇冰醋酸、甲醛固定液和不同剂量乙醇（75%、85%、100%）。1.3方法擦除宫颈表面分泌物后，以液基细胞毛刷取得柱状细胞和鳞状细胞间细胞，对样本同时行TCT、HPV-DNA、hTERC基因检测，避开月经期，若在采集过程中出现出血情况，应擦拭干净后再行采集，提前2d通知筛选者，不可盆浴、阴道冲洗、有性行为以及自行用药，样本在4°C温度下保存，不能超过1周P］。具体检测内容为：①TCT检查。按照TBS分类标准，明确WNL、ASC、AC、AG、SCC、LSIL、HSIL等内容，采用自动制片机制片，酒精固定后行巴式染色，对其进行细胞形态学分析。②HPV-DNA检测。采用SPR法，取样本1mL，离心5min,设置为12000转/min，DNA提取纯化，保存时应避免反复冻融;将PCR反应体系按照90uL剂量置入扩增管中，加入样本DNA模板，混匀后配置扩增体系，依据指定程序完成扩增；将变性扩增产物进行上机检测，启动SPR检测程序，置入HPV生物传感芯片，对阳性对照、阴性对照及探针的信号值进行判读。③hTERC基因检测。采用EISH技术，将样本置入离心管中，离心lOmin，设置为1500转/min，酶消化和低渗各30min,离心前后分别加入2mL、5mL固定液，最后重复固定2次，玻片制备，并对其分别进行75%、85%、100%乙醇预处理，将配置好的变性探针混合液进行变性杂交，时间为16h;复染，观察细胞核荧光杂交信号，以红、绿信号各为2个为正常，反之则为存在基因扩增，以正常检查者为对照，设定阈值，若扩增异常细胞比例高于阈值，提示为阳性，反之，则为阴性［8］。...